安捷倫1260高效液相操作規(guī)程.doc

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1、安捷倫液相1260高效液相色譜操作規(guī)程1.前期工作查找資料（最好是外文文獻(xiàn)）了解別人做該樣品時(shí)常用的流動(dòng)相和固定相。如果還不清楚樣品是什么物質(zhì)，最起碼也應(yīng)該對(duì)其極性進(jìn)行了解，為選擇合適的流動(dòng)相和固定相打好基礎(chǔ)。流動(dòng)相選擇注意事項(xiàng)：①　避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；②　所選用的流動(dòng)相一定要與樣品相溶；③　各流動(dòng)相之間可以很好的相溶；固定相選擇注意事項(xiàng)：a.正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如（NH2，APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中

2、各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（MethyleneChloride）等。b.反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。91.準(zhǔn)備工作①　用于液相色譜分析的

3、樣品溶液使用前要經(jīng)過0.15μm過濾器過濾，必須達(dá)到均勻而無顆粒的狀態(tài)；②　流動(dòng)相一定要選用色譜級(jí)別的（最好是默克、飛世爾、時(shí)聯(lián)等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4μm過濾器過濾，再用超聲波清洗儀脫氣處理20-30min；③　在連接柱子和色譜儀之前，閥件或管路一定要清洗干凈，（一般用異丙醇將管路清洗）2.儀器操作（一）將所選擇的流動(dòng)相加入相應(yīng)的試劑瓶中：棕色瓶對(duì)應(yīng)A泵，該瓶中只能加雙蒸水或娃哈哈純凈水；B、C、D泵根據(jù)需要添加。注：若流動(dòng)相中有水、乙腈最好現(xiàn)用現(xiàn)處理，不宜放置太長時(shí)間。（二）先打開計(jì)算機(jī)登陸windows操作系統(tǒng)，再將儀器的泵、色譜柱、檢測(cè)器打開，待計(jì)算

4、機(jī)界面顯示連接好后，雙擊桌面“聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)，進(jìn)入化學(xué)工作站，從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面。9模塊右上角狀態(tài)燈顏色說明：無色，未開電源或者模塊準(zhǔn)備就緒黃色，模塊未準(zhǔn)備就緒　　　　　　　　　　　　綠色，正在進(jìn)樣分析　　紅色，模塊出錯(cuò)所有模塊紅色，儀器有漏液工作站圖形顏色說明：　　綠色，模塊準(zhǔn)備就緒黃色，模塊未準(zhǔn)備就緒　　　　　　　　　　　　藍(lán)色，正在進(jìn)樣分析　　　　　　　　　　　　　紅色，出錯(cuò)或者不能聯(lián)機(jī)灰色,此模塊沒啟用9等度洗脫：直接選擇比； 梯度洗脫：在中設(shè)定好初始比例，再點(diǎn)擊，設(shè)置一定時(shí)間內(nèi)不同的比例。 方法如下: 前10min中，A：B=10:90 第10-

5、15min中，用B:100% 第15-30min，A逐漸增加到20%，B逐漸減少80%。 設(shè)置：10min，A：B=10:90； 10.1min，　B:100%； 15min，A:B=0：100%； 30min，A:B=20：80（一）右擊四元泵界面：選擇“瓶填充”點(diǎn)擊“溶劑瓶填充量”設(shè)置溶劑瓶中流動(dòng)相實(shí)際體積，也可設(shè)定低體積關(guān)泵。旋開排氣閥（逆時(shí)針），點(diǎn)擊“方法”選項(xiàng)進(jìn)入泵編輯的畫面。將泵的流量設(shè)到5ml/min,溶劑A設(shè)到100%，打開泵，觀察排出管線中的氣體，直到管線內(nèi)由溶劑瓶到泵入口無其起泡為止，查看柱前壓力（若大于10bar，則應(yīng)更換排氣閥內(nèi)的過濾白頭）。依次切換到

6、B、C、D溶劑分別排氣。9（一）將泵的流速調(diào)到0.5ml/min,設(shè)定四元泵最初的溶劑比例，如A=80%，B=20%；關(guān)閉排氣閥。（二）再將流速設(shè)定到所需流量，待壓力視數(shù)穩(wěn)定，打開檢測(cè)器燈，觀察基線情況。注：若反復(fù)幾次檢測(cè)器顯示錯(cuò)誤，右擊“視圖”中的“工作日志”“當(dāng)前工作日志”查看是什么錯(cuò)誤。以上步驟用文字也可描述為1)打開計(jì)算機(jī)，登陸windows操作系統(tǒng)。2)打開主機(jī)各模塊電源（從上至下），待各模塊完成自檢后，再雙擊桌面“儀器1聯(lián)機(jī)”圖標(biāo),進(jìn)入化學(xué)工作站，從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面。3)把各流動(dòng)相放入溶劑瓶中。4)旋開排氣閥（逆時(shí)針），右單擊“四元泵”圖標(biāo)

7、出現(xiàn)快捷鍵，點(diǎn)擊“方法”選項(xiàng)進(jìn)入泵編輯畫面。將泵流量設(shè)到5ml/min，溶劑A設(shè)到100%，打開泵，排出管線中的氣體2—3分鐘，直到管線內(nèi)由溶劑瓶到泵入口無氣泡為止,查看柱前壓力（若大于10bar，則應(yīng)更換排氣閥內(nèi)過濾白頭）。5)依此切換到B、C、D溶劑分別排氣。6)將泵的流量設(shè)到0.5ml/min，多元泵則再設(shè)定溶劑配比，如A=80%，B=20%；關(guān)閉排氣閥（順時(shí)針）。7)再將泵的流量設(shè)到0.8ml/min，2分鐘后將泵的流量設(shè)到1ml/min，沖洗色譜柱20—30分鐘。8)把緩沖液換成流動(dòng)相，待柱前