石蠟切片制作過程.ppt

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1、石蠟切片制作過程國家玉米改良中心河北分中心脫水、透明第1日1.脫水前用70%的酒精浸洗兩次，第一次浸洗1-2h，并抽真空15min左右，第二次換液后在室溫下過夜第2日：2.在濃度分別為80%，85%，90%，95%，100%，100%的酒精中脫水，各級酒精脫水時(shí)間為90min。共需9h。3.經(jīng)1/2二甲苯和1/2酒精的混合液過渡，在純二甲苯，純二甲苯中進(jìn)行透明，過渡和兩次透明的時(shí)間也都是90min。共需4.5h（建議在第二次二甲苯透明時(shí)也抽真空一次，保證材料中不存在氣泡）浸蠟第2日晚4.將裝有透明好的材料的小瓶（此時(shí)小瓶中

2、的二甲苯的量應(yīng)位于小瓶的1/2處）中放入浮蠟（使用浮蠟的目的使其不與材料直接接觸，否則會使材料變脆），使浮蠟占據(jù)小瓶另外的1/2，蓋上瓶蓋，放于38℃烘箱過夜。5.繼續(xù)向小瓶中加浮蠟或蠟?zāi)?，并升高溫度?5℃（目的是加大石蠟在二甲苯中的溶解量），若到晚上蠟?zāi)┤晕慈芙馔耆蛯囟壬?0℃過夜。（但要注意溫度過高會使材料變脆）6.晚上將干凈的蠟塊放于65℃烘箱中，便于次日直接使用融化好的石蠟蠟?zāi)┖透∠灥闹谱鞣椒ǎ盒枰崆爸苽浜孟災(zāi)┑闹谱鞣椒ǎ簩⑦^濾好的并凝固徹底的石蠟塊在篩子上來回擦即可獲得。浮蠟的制作方法：將裝有干凈的熔

3、融石蠟瓶子從烘箱中拿出，不斷順時(shí)針或逆時(shí)針搖晃使石蠟液體中產(chǎn)生氣泡，直至液體的石蠟搖晃不懂而變成固體的浮蠟，建議將浮蠟切碎后使用，加快的溶解速度。浸蠟、包埋第3日7.將烘箱溫度設(shè)為68℃傾出1/2石蠟二甲苯，導(dǎo)入1/2融化石蠟?傾出1/2石蠟二甲苯，導(dǎo)入1/2融化石蠟?將材料放入純石蠟中?將材料放入純石蠟中?將材料放入純石蠟中，每次2h。第3日晚8.將折好的包埋盒放在用10μL槍頭盒制作的容器內(nèi)置于地面，將液體石蠟倒入包埋盒內(nèi)，等1min左右，借地溫使包埋盒底部稍作凝固后，鑷子在酒精燈火焰上預(yù)熱后，將材料從小瓶中夾入包埋盒

4、內(nèi)，并將材料在包埋盒內(nèi)擺好。（此過程越快越好，如果包埋盒內(nèi)蠟的表面出現(xiàn)薄膜時(shí)，用燒燙的鑷子將其撥開）此時(shí)，也應(yīng)注意小瓶內(nèi)石蠟的凝固，為防止此現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)不時(shí)的在酒精燈火焰上烤下。將材料都夾入包埋盒內(nèi)后，雙手將包埋盒緩緩提起，并移入盛有涼水的水盆中，待表層石蠟?zāi)Y(jié)一層薄膜后，迅速將包埋盒翻轉(zhuǎn)使盒底向上，并用重物（篩子最好）將包埋盒壓在水底。1h后即可凝固好。9.將包埋好的蠟塊放入4℃儲藏，隨用隨取。蠟塊的修整和切削第4日1.修蠟：將蠟塊修成長寬比為3:2而且上下兩邊一定要盡量平行（保證切蠟時(shí)，蠟帶是直的而不是彎的），材料距

5、四周的距離約為2mm的小蠟塊即可。2.切蠟：將蠟塊粘在小木塊上，并在-20℃凍幾分鐘（使材料和石蠟的硬度更加一致，方便切蠟），將木塊固定在切片機(jī)上開始切片。展片和貼片第4日1.展片：粘貼劑使用梅氏蛋白甘油粘貼劑1%的稀釋液：在載玻片（用洗滌靈清洗干凈的載玻片）上滴200μL的稀釋液，并涂均勻，將蠟帶置于稀釋液上并調(diào)整位置，置于50℃烘箱。2.貼片：將載玻片置于50℃烘箱4h以上即可完成。備注：為了將染色和修蠟、切片、貼片連貫起來，建議在10:00開始修蠟至貼片的步驟，并在12:00之前完成。染色（海氏蘇木精——固綠）1.第

6、4日下午16:30開始：純二甲苯5min純二甲苯5min1/2二甲苯和1/2酒精5min100%酒精5min100%酒精5min95%酒精5min85%酒精5min75%酒精5min50%酒精5min蒸餾水輕輕漂洗——4%鐵帆4h蒸餾水輕輕漂洗——0.5%蘇木精8-12小時(shí)2.第5日上午8:00開始：2%鐵帆20min蒸餾水輕輕漂洗——50%酒精5min75%酒精5min85%酒精5min95%酒精5min0.1%固綠1min100%酒精30s100%酒精30s1/2二甲苯和1/2酒精5min純二甲苯5min——加拿大樹脂

7、封片備注：每一個(gè)18×18mm的蓋玻片用樹膠二甲苯（1:1）的量為18μL。