苯酚硫酸法測總糖.doc

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1、苯酚-硫酸法苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。[試劑]6%苯酚：先配置80%苯酚：80g苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲(chǔ)存。再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于燒杯中，加入960ul水（每次測定均需現(xiàn)配），測定的時(shí)候就用6%的苯酚來測！濃硫酸[操作]1．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8m

2、l,各以蒸餾水補(bǔ)至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2．樣品含量測定：吸取2.0ml樣品，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置30分鐘以后于490nm測光密度。每次測定取雙樣對(duì)照。以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量?？赡苡幸韵聠栴}需要注意:1。苯酚是否重蒸、其溶液濃度、是否現(xiàn)配現(xiàn)用2。加入硫酸后是否加熱、顯色時(shí)間的確定3。閣下所選波長：這個(gè)最為重要，因?yàn)橐?/p>

3、糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。如果閣下的多糖樣品不是單一品而是數(shù)種混合（純化也難一達(dá)到100%純），則波長一定要掃描過再做4。加濃硫酸前要搖勻，加之后也要搖勻。