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1、基因工程的載體劉文利載體定義：要把一個有用的基因通過基因工程手段送進生物細胞中，需要運載工具。攜帶外源基因進入受體細胞的這種工具就叫載體（Vector）。特點：在宿主細胞中獨立自主的復制、容易分離純化、包含外源基因插入位點（不影響擴增的非必須區(qū)域）技術路線載體的分類按來源分類：1.質粒2.噬菌體載體3.科斯載體4.真核病毒載體5.其他載體按用途分類：克隆載體表達載體原核表達載體主要元件：強啟動子SD順序篩選標志其它調控基因真核表達載體主要元件：啟動子增強子RNA剪接信號負調控元件終止子和Poly
2、A序列質粒在細菌細胞內作為與宿主染色體有別的復制子而進行復制并且在細胞分裂時能恒定的傳遞給子代細胞的獨立遺傳因子。雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子、大小在1-200kb之間。天然質粒的類型嚴緊型質粒（Stringentplasmid）：多具自身傳遞能力的大質粒、復制與染色體DNA偶聯、1-2個拷貝。松弛型質粒（Relaxedplasmid）：分子量小、不具傳遞能力、復制在松弛控制下進行。自身傳遞質粒和非自身傳遞質粒?；蚬こ藤|粒載體1.較小的分子量和松弛型復制子2.1-2個篩選標記3.限制酶單一識別與切割
3、位點4.具有插入失活（或插入表達）的篩選基因質粒的工作原理質粒的應用優(yōu)點：具有遺傳傳遞和遺傳交換的能力，外源基因引入細菌細胞純化和擴增外來基因或表達外來基因產物的媒介物。應用：擴增克隆目的基因、表達外源基因產物、構建新質粒、分子雜交。pBR322pUC18/pUC19Ti質粒宿主廣泛，能夠轉化所有雙子葉植物。整合到宿主DNA上的T-DNA成為染色體正常遺傳成分，永久居留和世代遺傳。T-DNA上的Opine合成酶基因有強大的啟動子，啟動外源基因高效率表達。穿梭載體穿梭載體(shuttlevecto
4、r)是指含有兩個親緣關系不同的復制子，能在兩種不同的生物中復制的。例如既能在原核生物中復制,又能在真核生物中復制的載體.這類載體不僅具有細菌質粒的復制原點及選擇標記基因,還有真核生物的自主復制序列(ARS)以及選擇標記性狀,具有多克隆位點.通常穿梭載體在細菌中用于克隆,擴增克隆的基因,在酵母菌中用于基因表達分析.BAC細菌人工染色體（BAC）是指一種以F質粒為基礎建構而成的細菌染色體克隆載體，長用來克隆150kb左右大小的DNA片段，最多可保存300kb個堿基對。YAC酵母人工染色體（YAC）載
5、體是利用釀酒酵母的染色體的復制元件構建的載體，其工作環(huán)境也是在釀酒酵母中。釀酒酵母含16條染色體，其大小為225-1900kb，總計有14×106bp；具真核mRNA的加工活性。λ噬菌體λ噬菌體時一種大腸桿菌雙鏈DNA噬菌體，含61個基因，其中38個參與生命周期的活動，重組的DNA可隨寄主細胞一起復制和增值。研究歷史悠久，遺傳背景和生物學特性明確。寄主狹窄，安全性高。線性雙鏈DNA兩端具有12個核苷酸組成的粘性末端（環(huán)化后形成cos位點）。λDNA分類插入型載體：10kb以內的外源基因插入，用于
6、cDNA及小片段DNA的克隆。免疫缺陷型和β-半乳糖苷酶失活型替換型載體：承受較大分子量的外源DNA片段，適用于高等真核生物的染色體DNA克隆。與質粒相比，具有易操作、陽性克隆多等特點，廣泛用于各類基因庫的構建。已克隆和表達的有DNA聚合酶和DNA連接酶Ⅰ等。溫度敏感突變控制溶源誘導?？滤官|粒是一類由人工構建的含有λDNA的cos序列和質粒復制子的特殊類型的質粒載體。特點具有λ噬菌體的特性具有質粒載體的持性具有高容量的克隆能力具有與同源序列的質粒進行重組的能力柯斯克隆原理正常情況下的λDNA形成
7、數百個拷貝組成的多連體分子。cos位點與Ter體系是柯斯克隆的兩大必要條件?？滤官|粒的優(yōu)點具備噬菌體和質粒兩方面的特性，提高了克隆DNA片段能力（31kb-45kb），多用于構建真核生物的基因文庫。非重組體出現的概率較低，提高了篩選外源基因重組體的幾率。M13噬菌體絲狀大腸桿菌噬菌體單鏈環(huán)狀DNA分子，長約6.4kb生活史：含F質粒雄性大腸桿菌特有，通過性毛轉染(+)鏈DNA，合成200個(-)鏈DNA模版，再繼續(xù)合成(+)鏈DNA?？寺≥d體單鏈噬菌體載體的優(yōu)點M13的感染與釋放不會殺死宿主菌，
8、僅導致宿主菌生長緩慢；M13DNA在宿主菌內既可以是單鏈也可以是雙鏈；M13的包裝不受DNA大小的限制，其噬菌體顆粒的大小可隨DNA的大小而改變，即使DNA的大小比本身DNA的大小超出6倍，仍能進行包裝。由于M13的這些特性，而使之廣泛地用于DNA重組。猿猴空泡病毒SV40小型20面體的蛋白質顆粒，由三種蛋白VP1、VP2、VP3構成。閉合環(huán)狀雙鏈DNA，5.2kb，編碼T抗原、t抗原、VP1、VP2、VP3。T抗原啟動DNA復制。SV40作為克隆載體有其局限性：①SV40基因組的晚期功能區(qū)的裂
