硫酸苯酚法測定總糖原理與步驟.doc

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1、原理：苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10－100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。步驟：.5%苯酚溶液：取適量苯酚(A.R)，高溫蒸餾，收集180℃餾分，稱取50.0g，用水溶解，最后定容于1000m1棕色容量瓶中，冷藏避光保存?！　　?葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(200mg/L)，精稱110℃恒重的葡萄糖20.0mg，用水溶解，定容至100m1。精密吸取2.0，4.0，6.0，8

2、.0，10.0ml分別置于100ml量瓶中加水定容至刻度，搖勻得葡萄糖稀釋液?！　　?標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別精密量取上述各稀釋液2ml置具塞試管中，同時(shí)精密量取水2.0ml置另一具塞試管中，各管分別加5%苯酚溶液（新制）1ml，搖勻，然后迅速加入濃硫酸5.0ml，立即搖勻，于40℃水浴中保溫30min，取出，置冷水浴中5min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做參比，于490nm波長處測定各溶液吸收度，以葡萄糖稀釋液的濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?！　　?樣品的測定：吸取已定容的

3、水解樣（必要時(shí)可稀釋到一定體積）2.0ml置于25ml比色管中，加5%苯酚試劑1.0ml，迅速滴加5.0ml濃硫酸，搖勻后在室溫下靜置30min；每個(gè)樣品做三個(gè)平行樣。于490nm處用空白調(diào)零測吸光度，然后代入標(biāo)準(zhǔn)曲線算出其總糖含量。