GBT 18644-2002 豬囊尾蜘病診斷技術(shù)

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1、GB/'r18644--2002前臺(tái)豬囊尾拗病(cysticercosiscellulosae)(俗稱豬囊蟲(chóng)病)，是由寄生在人體小腸內(nèi)的豬帶絳蟲(chóng)(taeniasolium)的幼蟲(chóng)(cysticercuscellulosae)所引起的，是一種危害嚴(yán)重的人獸互源性寄生蟲(chóng)病世界動(dòng)物衛(wèi)生組織[WorldOrganizationforAnimalHealth(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE1將該病列為B類疾病目前，該病還廣泛存在于發(fā)展中國(guó)家，不僅嚴(yán)重地影響著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且還威脅著人類身體健康，乃至生命。因此，199

2、3年聯(lián)合國(guó)衛(wèi)生組織將該病列為需要根除的六大疾病之一豬囊尾坳病多不表現(xiàn)臨床癥狀。目前，該病的檢疫方法有舌檢查法和免疫學(xué)檢查法。前者僅適用于舌上寄生(27%030寫)的病豬。后者包括皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、炭粒凝集試驗(yàn)、間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等等。其中，ELISA法具有高敏感性和特異性，是最常用的一種方法。本標(biāo)準(zhǔn)從病原分離、鑒定和血清學(xué)(ELISA方法)兩方面規(guī)定了豬囊尾坳病檢查方法，結(jié)果更為h(靠本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的ELISA法，適用于感染豬的定性，最早可以檢出感染9天的囊尾勤病豬。也適用于免疫豬群抗體水平的評(píng)估。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為

3、標(biāo)準(zhǔn)的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:韓宇、姜秀云、趙權(quán)。中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/7門86442002豬囊尾蜘病診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforcysticercosiscellulosae1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定r豬囊尾坳病的病原分離與鑒定和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)兩種診斷技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬囊尾坳病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查以及檢疫。2病原分離與鑒定2.1病原分離2.1.1樣品采集采集豬的咬肌、舌肌、內(nèi)腰肌、隔肌、肋間肌、肩腳肌等，亦可采集腦、心臟、肝臟、肺臟

4、等2門.2樣品分離成熟的豬囊尾坳為長(zhǎng)橢圓形仁(6mm-10mm)X5mm]，半透明的囊壁內(nèi)充滿液體，上有一個(gè)黍粒大小的白色小結(jié)節(jié)即為頭節(jié)(scolex)和頸節(jié)(neck)腦內(nèi)寄生的則為圓球形郁mm-10mm將上述任何部位的囊尾蝴，以手術(shù)刀和鑷子剝離后，以生理鹽水洗凈，并用濾紙吸干2.2病原鑒定2.2門分離樣品的壓片制備以剪刀剪開(kāi)囊壁，取出完整的頭節(jié)，再以濾紙吸干囊液后，將其置于兩張載玻片之間并壓片，于兩張載玻片問(wèn)加人1-2滴生理鹽水后置于顯微鏡下鏡檢2.2.2鏡檢以低倍(物鏡8倍、目鏡5倍)觀察囊尾蝴頭節(jié)的完整性。2.2-3結(jié)果判定低倍鏡檢，可見(jiàn)到頭節(jié)的頂部有頂突，頂突上有內(nèi)

5、外兩圈排列整齊的小鉤，頂突的稍下方有四個(gè)均等的圓盤狀吸盤，即判為豬囊尾蝴3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)11材料準(zhǔn)備3.1.1器材ELISA反應(yīng)板、酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、加樣器、洗瓶、10cmxlcm普通濾紙條等3門.2試劑豬囊尾黝層析抗原、葡萄球菌A蛋白(SPA)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記物(HRP-SPA),豬囊尾蝴標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽(yáng)性全血濾紙片等3門-3被檢豬全血血片將10cmx1cm普通濾紙條的一端標(biāo)記被檢豬號(hào)碼，另一端吸取被檢豬任何部位血液1-2滴。于室內(nèi)陰干后，置于4C冰箱內(nèi)(可保存6個(gè)月)。3·1.4溶液配制_中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)且監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局2002-02-19批準(zhǔn)

6、2002-05-D1實(shí)施GB/T18644一2002溶液配制的方法見(jiàn)附錄A(標(biāo)準(zhǔn)的附錄)3.2操作方法I2門抗原包被3.2.1.1Ii先以抗原包被液(見(jiàn)附錄A中Al洗滌ELISA反應(yīng)板各孔三次3.2門.2以抗原包被液將抗原按使用說(shuō)明書稀釋至工作濃度。3.2.1.3月1加樣器加I_作濃度抗原至ELISA反應(yīng)板各孔內(nèi)，每孔。1m工，加蓋后置于室溫(11〔一29〔)過(guò)夜。注:包被過(guò)夜的ELISA反應(yīng)板加蓋后置于冰箱冷凍室內(nèi)(可保存G個(gè)月)?；?qū)贿^(guò)夜的ELISA反應(yīng)板按3.2.2方法洗滌后.晾干，裝人塑料袋內(nèi)密封置于4(冰箱內(nèi)(可保存1個(gè)月)12.2洗滌川力甩凈包被過(guò)夜的ELIS

7、A反應(yīng)板孔內(nèi)的抗原包被液，每孔加人洗滌液(見(jiàn)附錄A中A2),浸泡3min后，用力甩去洗滌液，并用濾紙吸去殘留的洗滌液和驅(qū)除孔內(nèi)氣泡，重新加人洗滌液，按同樣方法共洗滌3次，即3X3min沖洗。12.3血片的處理將被檢血片、標(biāo)準(zhǔn)}升勝血片及標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血片均剪成1cmX1cm大小，分別置于青霉素瓶?jī)?nèi)，每1二，XI〔。、血片加人稀釋液(見(jiàn)附錄A中A2)0.3mL，浸泡20min，即血片變白后即可。12.4M]樣12.4.1侮份被檢血片浸液加兩孔，每孔。.1ML.3.2.4.2標(biāo)準(zhǔn)陰性、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照孔加相應(yīng)血片浸液