hplc法測定鹽酸伊伐布雷定片劑中有關(guān)物質(zhì)

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1、HPLC法測定鹽酸伊伐布雷定片劑中有關(guān)物質(zhì)【關(guān)鍵詞】鹽酸伊伐布雷定片；高效液相色譜法；有關(guān)物質(zhì)鹽酸伊伐布雷定合成后有異構(gòu)體存在，分別為R—異構(gòu)體和S一鹽異構(gòu)體。R—異構(gòu)體無藥理活性，但通過在國內(nèi)外較多研究資料表明R—異構(gòu)體在制劑過程中并不發(fā)生轉(zhuǎn)換，鹽酸伊伐布雷定原料中控制了R-異構(gòu)體含量，者制劑中不需檢測。本文建立的HPLC法測定鹽酸伊伐布雷定片有關(guān)物質(zhì)的方法，作為鹽酸伊伐布雷定片的質(zhì)量控制?，F(xiàn)將其有關(guān)物質(zhì)測定的研究資料總結(jié)如下。1儀器與試藥1.1儀器：日本島津公司:LC-10ATvp輸液泵、SPD—10Avp紫外檢測

2、器、ANASTAR色譜工作站。1.2檢測樣品和試藥:鹽酸伊伐布雷定片(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司提供測試樣品：090301、090302、090303、090304、090305、090306)，水為超純水，色譜級乙腈（成都化學(xué)試劑廠生產(chǎn)），磷酸鹽緩沖液為AR級。2方法與結(jié)果2.1色譜條件：　流動相：乙腈—pH7.6磷酸鹽緩沖液(30：70—40：60)梯度洗脫(見表1),色譜柱：KromasilC18柱(0.46cm×25cm，5μm)，流速：1.0m/min，檢測波長：220nm，柱溫：25℃。2.2制備供試品溶液：

3、在同批號樣品中取20片鹽酸伊伐布雷定片，研細(xì)后，精密稱定適量藥粉，置10ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度(含量1mg/ml)，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3制備對照品溶液：精密吸取供試品溶液1mL，置100mI量瓶中，用流動相稀釋制成1％的樣品自身對照溶液。2.4最低檢測限：分別稱取鹽酸伊伐布雷定適量，用流動相稀釋成系列濃度的溶液，并精密吸取20l，注入色譜儀中。結(jié)果表明：進(jìn)樣量為2.03ng時，峰高約變?yōu)榛€噪音的3倍。故該條件下儀器對其成分的檢測靈敏度高。2.5精密度試驗：取品供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣4次，每次2

4、0.0μl，將4次峰面積精密度計算，RSD=0.98%。2.6穩(wěn)定性實驗：　取同一樣品液分別在0h、1h、2h、4h、6h、8h進(jìn)樣檢測，每次20μl，對所得的6次峰面積進(jìn)行精密度計算，求得RSD為1.97%，表明樣品鹽酸伊伐布雷定片中有關(guān)物質(zhì)在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.7重復(fù)性試驗：取同批號鹽酸伊伐布雷定片20片，研細(xì)，按對角分樣的原則分成6份，將每份樣品按制備供試品溶液的方法制備樣品液，進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測定，并根據(jù)線性關(guān)系計算有關(guān)物質(zhì)量，樣品中有關(guān)物質(zhì)的平均質(zhì)為0.62％，RSD為1.45％。3討論鹽酸伊伐布雷定片品是首例單純減

5、緩心率的有效藥物，具有特殊降低心率的作用，不良反應(yīng)小，其耐受性好，長期應(yīng)用該藥能有效改善改善心臟泵血的功能。鹽酸伊伐布雷定片劑已在國外有銷售，目前在國內(nèi)尚未有廠家生產(chǎn)銷售，是伊伐布雷定的鹽酸鹽［1］，其化學(xué)名：3一(3一［［(7S)(3,4一二甲氧基苯并環(huán)丁烷［4.2.0］辛一1,3,5一三烯一7一基)甲基］一甲氨基］丙基)一1,3,4,5一四氫一7,8一二甲氧基一2—氫一3一苯并氮雜卓一2一酮鹽酸鹽。適用于不耐受或禁用β阻斷劑和竇性心律正常的慢性穩(wěn)定型心絞痛的患者［2］，是第一個選擇特異性作用于心臟起搏電流的抑制劑［

6、3］，具有特殊降低心率的作用，其耐受性好，不良反應(yīng)小，長期應(yīng)用伊伐布雷定片可有效改善心衰動物左心室的結(jié)構(gòu)和功能、改善心臟泵血的功能。國內(nèi)外有較多關(guān)于檢測鹽酸伊伐布雷定片有關(guān)物質(zhì)的研究，我們以上采用的HPLC法對其有關(guān)物質(zhì)的檢測，采用了流動相梯度洗脫的方法，節(jié)約了檢測時間，并使各雜質(zhì)峰都能很好地分離，使檢測結(jié)果更為準(zhǔn)確。計算有關(guān)物質(zhì)的方法：以自身溶液對照法計算雜質(zhì)的含量。供試品溶液色譜圖中若有雜質(zhì)峰，其最大雜質(zhì)峰面積不得大于對照液主峰面積的一半，各雜質(zhì)峰總面積不得大于對照液主峰面積的2倍。其測得有關(guān)物質(zhì)的平均含量為0.6

7、2％，符合制劑中對有關(guān)物質(zhì)的要求。采用高效液相色譜法測定鹽酸伊伐布雷定片的有關(guān)物質(zhì)，該方法的重現(xiàn)性、精密度、分離度和穩(wěn)定性等均符合相關(guān)要求，且靈敏度高，可用于鹽酸伊伐布雷定片的有關(guān)物質(zhì)控制。