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《ATP通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文題名（中英文對(duì)照）：ATP通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡ATP-inducedinflammasomeactivationandpyroptosisisregulatedbyAMP-activatedproteinkinaseinmacrophages作者姓名：魏紅霞指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱(chēng)：歐陽(yáng)東云博士研究員學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：細(xì)胞生物學(xué)學(xué)位類(lèi)型：學(xué)術(shù)學(xué)位論文提交日期：2017年5月論文答辯日期:2017年6月答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：學(xué)位授予單位和日期：
2、2017年6月29日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得暨南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解暨南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論
3、文被查閱和借閱。本人授權(quán)暨南大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū)）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：電話：通訊地址：郵編：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文ATP通過(guò)調(diào)節(jié)AMPK信號(hào)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡碩士研究生魏紅霞專(zhuān)業(yè)細(xì)胞生物學(xué)導(dǎo)師歐陽(yáng)東云研究員暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫生物學(xué)系摘要目的：巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗感染最重要的固有免疫
4、細(xì)胞之一，也是聯(lián)系固有免疫和適應(yīng)性免疫的紐帶。巨噬細(xì)胞通過(guò)其細(xì)胞表面或內(nèi)部的特異性識(shí)別受體（PRR），識(shí)別病原相關(guān)分子模式（PAMP），從而啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，并上調(diào)炎癥小體組成成分（如NLRP3、pro-caspase-1和pro-IL-1β等）的表達(dá)；如果巨噬細(xì)胞在損傷相關(guān)分子模式（DAMP）信號(hào)（即危險(xiǎn)信號(hào)分子）的進(jìn)一步刺激下，上述炎癥小體成分可組裝成具有活性的炎癥小體，釋放成熟的caspase-1和IL-1β等，或誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡（焦亡）。細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharides,LP
5、S）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的重要組分之一，位于其細(xì)胞壁的外壁層。在人體免疫系統(tǒng)對(duì)抗細(xì)菌入侵時(shí)，LPS作為PAMP被巨噬細(xì)胞的PRR所識(shí)別，而ATP是由細(xì)菌或宿主細(xì)胞在細(xì)菌感染或組織損傷的情況下釋放的危險(xiǎn)信號(hào)分子，LPS激活的細(xì)胞在ATP的進(jìn)一步刺激下，誘導(dǎo)炎癥小體活化，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡。以前有研究發(fā)現(xiàn)，ATP處理可以導(dǎo)致腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的活化。AMPK是細(xì)胞能量代謝的感受器。然而，AMPK信號(hào)通路是否參與以及如何參與ATP誘導(dǎo)的炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡的調(diào)控，目前尚不明確。本研究以LPS活
6、化的巨噬細(xì)胞為模型，包括小鼠巨噬細(xì)胞系J774A.1、巰基乙酸鹽（thioglycollate,TG）誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠骨髓體外培養(yǎng)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（BMDM），探討胞外ATP誘導(dǎo)炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡與AMPK信號(hào)通路的關(guān)系。本項(xiàng)目還將探討AMPK信號(hào)通路調(diào)控對(duì)細(xì)菌感染的小鼠膿毒癥模型生存率的影響，驗(yàn)證該信號(hào)通路對(duì)炎癥小體活化和細(xì)胞焦亡的調(diào)控作用機(jī)制。方法：LPS處理巨噬細(xì)胞，可上調(diào)炎癥小體相關(guān)組分（包括NLRP3、pro-caspase-1、pro-IL-1β）的表達(dá)；在ATP的進(jìn)一步作
7、用下，NLRP3招募凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosisassociatedspecklikeproteincontainingaCARD,ASC）（ASC因此聚集成speck），共同組裝成有活性I暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文的炎癥小體，激活caspase-1，并將pro-IL-1β剪切加工，細(xì)胞發(fā)生焦亡，釋放成熟的IL-1β和HMGB1。因此，本論文利用多種方法檢測(cè)LPS+ATP激活炎癥小體和細(xì)胞焦亡，以及AMPK信號(hào)對(duì)上述炎癥小體和細(xì)胞焦亡的調(diào)控作用：由于發(fā)生焦亡的細(xì)胞其細(xì)胞膜上形成眾多孔隙，使細(xì)胞膜
8、失去完整性，故采用碘化丙錠（PI）染色法檢測(cè)細(xì)胞焦亡；免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)及上清中IL-1β、HMGB1和caspase-1的表達(dá)水平，指示炎癥小體激活和細(xì)胞焦亡的發(fā)生；免疫熒光技術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞P2X7嘌呤能受體（P2X7R）以及ASC的亞細(xì)胞分布及熒光強(qiáng)度；CBA試劑盒（內(nèi)含結(jié)合相應(yīng)抗體的免疫微球）結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物血清中的IL-1β表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)小鼠腹腔中中性粒細(xì)胞比例的影響；利用二甲雙胍作為AMPK激動(dòng)劑，或compo
