早期梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查的現(xiàn)狀

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1、早期梅毒實(shí)驗(yàn)室檢查的現(xiàn)狀　　非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率　　非特異性梅毒血清學(xué)檢查方法有快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)(RPR)和甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（TRUST）兩種。RPR是20世紀(jì)80年代問世的非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn),也是目前國(guó)內(nèi)各實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用的主要篩查試驗(yàn)。RPR法檢測(cè)血清中非特異性抗體,所用抗原為標(biāo)準(zhǔn)的牛心肌脂抗原,主要用于早期梅毒的診斷,王劍等［2］報(bào)道RPR用于早期梅毒檢測(cè)陽(yáng)性率為75%～85%。該方法有操作簡(jiǎn)便、迅速、結(jié)果容易判定、不需滅活、不需顯微鏡、抗原不需新鮮配制等優(yōu)點(diǎn),適用于大量標(biāo)本檢測(cè),目前許多血站用此試驗(yàn)對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行梅毒普查。但凡屬于密螺旋體屬的

2、螺旋體均具有與梅毒螺旋體完全一樣的類脂質(zhì)抗原，其主要成份是心擬脂，可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體，并與牛心磷脂發(fā)生反應(yīng)，因此易出現(xiàn)生物學(xué)假陽(yáng)性反應(yīng)，且當(dāng)抗體含量過高時(shí)易出現(xiàn)假陰性反應(yīng),即前帶現(xiàn)象(prozonephenomnon)［3］。路麒等［4］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)溫度較低（低于9℃）時(shí)，RPR的假陰性率達(dá)10.1%時(shí)會(huì)有漏檢。而TRUST試驗(yàn)所用的抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇,與RPR方法比較,TRUST試驗(yàn)是在VDRC試劑中加了甲苯胺紅溶液,陽(yáng)性呈紅色有不同程度的凝塊懸于液體中,在白色紙卡上結(jié)果清晰易讀,簡(jiǎn)便快速,穩(wěn)定性好,對(duì)非特異性反應(yīng)素抗體導(dǎo)致的陽(yáng)性標(biāo)本，TRUST法

3、的檢出率和重復(fù)性都強(qiáng)于RPR法,EbelA等［5］通過實(shí)驗(yàn)比較認(rèn)為TRUST法比RPR效價(jià)測(cè)定高一個(gè)滴度，根據(jù)滴度的變化有助于判斷梅毒的治療效果、復(fù)發(fā)或再感染,這是其他方法不可替代的。缺點(diǎn)是許多因素影響結(jié)果,如高脂血癥和抗心磷脂抗體陽(yáng)性的血清均可干擾而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果［6］。黃波等［7］報(bào)道此法對(duì)早期梅毒檢測(cè)出現(xiàn)較高的假陰性（10%）。王治萍等［8］通過改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用全自動(dòng)微孔板法改進(jìn)TRUST,實(shí)現(xiàn)機(jī)械操作，減少了人為因素及標(biāo)本差錯(cuò)，可使其敏感度和特異性提高3%以上。　　重組基因與免疫反應(yīng)的臨床應(yīng)用　　采用純化重組基因的梅毒抗原,以膠體金作為指示標(biāo)記,于硝酸纖維素膜上進(jìn)行反應(yīng)（

4、膠體金法）,以雙抗原夾心法原理，快速定性檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體特異性抗體，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)及無需儀器設(shè)備之特點(diǎn)。王華等［9］報(bào)道此方法對(duì)早期梅毒的檢出率可達(dá)97.22%，其特異性和靈敏度與TPPA相近，對(duì)縮短TP的“窗口期”更有臨床意義，比TRUST能更早發(fā)現(xiàn)梅毒,抗體滴度低時(shí)更易觀察結(jié)果，可最大限度地避免實(shí)驗(yàn)過程中標(biāo)本處理、溫度、濕度、pH值等因素對(duì)結(jié)果的影響。由于膠體金法試劑成本低,符號(hào)顯示結(jié)果明確,操作簡(jiǎn)便,可分批或單人份檢測(cè),結(jié)果易保存。因此,采用靈敏特異的梅毒螺旋體抗體膠體金法可以完全替代TRUST,作為大批量標(biāo)本梅毒篩查的理想方法,又可以作為診斷試

5、驗(yàn)。但梁大立等［10］在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)血清或血漿中特異性梅毒螺旋體抗體濃度過低時(shí),梅毒螺旋體抗體膠體金法會(huì)產(chǎn)生假陰性反應(yīng)（1.57%）,這就需要與TPPA方法結(jié)合進(jìn)行綜合判斷。梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TPELISA)是一種通過基因工程,經(jīng)利用梅毒螺旋體多肽抗原(KD47、KD42、KD15)包被于反應(yīng)板的試驗(yàn),用雙抗原夾心法測(cè)定梅毒特異性抗體，為近年來應(yīng)用TP基因工程研制成功而建立的方法。Castro等［11］報(bào)道其靈敏度、特異度較高。TPELISA方法主要檢測(cè)梅毒螺旋體IgG和IgM抗體,俞偉國(guó)等［12］和程艷杰等［13］報(bào)道此類方法對(duì)早期梅毒的診斷，其敏感度在80%～99.

6、5%,特異性在90.2%～100%。此法檢測(cè)操作簡(jiǎn)便,取樣量少,不受樣本中纖維蛋白和溶血等影響,一次可進(jìn)行多份樣本的檢測(cè),具有敏感性高,特異性好,能自動(dòng)化,判斷結(jié)果客觀準(zhǔn)確,成本低,操作簡(jiǎn)便，適用于大量樣本,試劑盒價(jià)格便宜,設(shè)備簡(jiǎn)單,試劑穩(wěn)定,受干擾因素少,結(jié)果打印存檔,便于實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)驗(yàn)室管理等優(yōu)點(diǎn),是一種集篩查和確診為一體的檢測(cè)梅毒的好方法,值得臨床大力推廣。ELISA法對(duì)梅毒患者的檢出率與患者血清中梅毒螺旋體特異性抗體的含量有關(guān),當(dāng)患者血清梅毒螺旋體特異性抗體含量低于試劑檢測(cè)限時(shí),就有可能出現(xiàn)假陰性，且TPELISA檢測(cè)的是梅毒螺旋體總抗體,在梅毒患者治愈后相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間仍為陽(yáng)

7、性,因此Manavi等［14］認(rèn)為不利于臨床判定是近期感染還是曾經(jīng)感染和疾病狀態(tài)。免疫PCR法檢測(cè)梅毒螺旋體是目前最敏感的一種微量分子檢測(cè)方法,應(yīng)用于檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體,可直接檢查病原體的基因。史俊巖等［15］對(duì)120份梅毒血清同時(shí)進(jìn)行免疫PCR和ELISA法檢測(cè)，結(jié)果免疫PCR法陽(yáng)性檢出率為81.7%,而ELISA法僅為59.2%，認(rèn)為在相同條件下免疫PCR法敏感度優(yōu)于ELISA法。俞偉國(guó)等［12］通過實(shí)驗(yàn)比較也認(rèn)為免疫PCR