早期梅毒實驗室檢查的現(xiàn)狀

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1、早期梅毒實驗室檢查的現(xiàn)狀　　非特異性梅毒血清學試驗的陽性檢出率　　非特異性梅毒血清學檢查方法有快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實驗(RPR)和甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗（TRUST）兩種。RPR是20世紀80年代問世的非特異性梅毒血清學試驗,也是目前國內(nèi)各實驗室廣泛應(yīng)用的主要篩查試驗。RPR法檢測血清中非特異性抗體,所用抗原為標準的牛心肌脂抗原,主要用于早期梅毒的診斷,王劍等［2］報道RPR用于早期梅毒檢測陽性率為75%～85%。該方法有操作簡便、迅速、結(jié)果容易判定、不需滅活、不需顯微鏡、抗原不需新鮮配制等優(yōu)點,適用于大量標本檢測,目前許多血站用此試驗對獻血者進行梅毒普查。但凡屬于密螺旋體屬的

2、螺旋體均具有與梅毒螺旋體完全一樣的類脂質(zhì)抗原，其主要成份是心擬脂，可激發(fā)機體產(chǎn)生抗體，并與牛心磷脂發(fā)生反應(yīng)，因此易出現(xiàn)生物學假陽性反應(yīng)，且當抗體含量過高時易出現(xiàn)假陰性反應(yīng),即前帶現(xiàn)象(prozonephenomnon)［3］。路麒等［4］通過實驗發(fā)現(xiàn)溫度較低（低于9℃）時，RPR的假陰性率達10.1%時會有漏檢。而TRUST試驗所用的抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇,與RPR方法比較,TRUST試驗是在VDRC試劑中加了甲苯胺紅溶液,陽性呈紅色有不同程度的凝塊懸于液體中,在白色紙卡上結(jié)果清晰易讀,簡便快速,穩(wěn)定性好,對非特異性反應(yīng)素抗體導(dǎo)致的陽性標本，TRUST法

3、的檢出率和重復(fù)性都強于RPR法,EbelA等［5］通過實驗比較認為TRUST法比RPR效價測定高一個滴度，根據(jù)滴度的變化有助于判斷梅毒的治療效果、復(fù)發(fā)或再感染,這是其他方法不可替代的。缺點是許多因素影響結(jié)果,如高脂血癥和抗心磷脂抗體陽性的血清均可干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果［6］。黃波等［7］報道此法對早期梅毒檢測出現(xiàn)較高的假陰性（10%）。王治萍等［8］通過改進實驗方法發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用全自動微孔板法改進TRUST,實現(xiàn)機械操作，減少了人為因素及標本差錯，可使其敏感度和特異性提高3%以上?！　≈亟M基因與免疫反應(yīng)的臨床應(yīng)用　　采用純化重組基因的梅毒抗原,以膠體金作為指示標記,于硝酸纖維素膜上進行反應(yīng)（

4、膠體金法）,以雙抗原夾心法原理，快速定性檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體特異性抗體，具有快速、簡便、靈敏度高、特異性強及無需儀器設(shè)備之特點。王華等［9］報道此方法對早期梅毒的檢出率可達97.22%，其特異性和靈敏度與TPPA相近，對縮短TP的“窗口期”更有臨床意義，比TRUST能更早發(fā)現(xiàn)梅毒,抗體滴度低時更易觀察結(jié)果，可最大限度地避免實驗過程中標本處理、溫度、濕度、pH值等因素對結(jié)果的影響。由于膠體金法試劑成本低,符號顯示結(jié)果明確,操作簡便,可分批或單人份檢測,結(jié)果易保存。因此,采用靈敏特異的梅毒螺旋體抗體膠體金法可以完全替代TRUST,作為大批量標本梅毒篩查的理想方法,又可以作為診斷試

5、驗。但梁大立等［10］在實驗過程中發(fā)現(xiàn)血清或血漿中特異性梅毒螺旋體抗體濃度過低時,梅毒螺旋體抗體膠體金法會產(chǎn)生假陰性反應(yīng)（1.57%）,這就需要與TPPA方法結(jié)合進行綜合判斷。梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(TPELISA)是一種通過基因工程,經(jīng)利用梅毒螺旋體多肽抗原(KD47、KD42、KD15)包被于反應(yīng)板的試驗,用雙抗原夾心法測定梅毒特異性抗體，為近年來應(yīng)用TP基因工程研制成功而建立的方法。Castro等［11］報道其靈敏度、特異度較高。TPELISA方法主要檢測梅毒螺旋體IgG和IgM抗體,俞偉國等［12］和程艷杰等［13］報道此類方法對早期梅毒的診斷，其敏感度在80%～99.

6、5%,特異性在90.2%～100%。此法檢測操作簡便,取樣量少,不受樣本中纖維蛋白和溶血等影響,一次可進行多份樣本的檢測,具有敏感性高,特異性好,能自動化,判斷結(jié)果客觀準確,成本低,操作簡便，適用于大量樣本,試劑盒價格便宜,設(shè)備簡單,試劑穩(wěn)定,受干擾因素少,結(jié)果打印存檔,便于實驗室標準化和實驗室管理等優(yōu)點,是一種集篩查和確診為一體的檢測梅毒的好方法,值得臨床大力推廣。ELISA法對梅毒患者的檢出率與患者血清中梅毒螺旋體特異性抗體的含量有關(guān),當患者血清梅毒螺旋體特異性抗體含量低于試劑檢測限時,就有可能出現(xiàn)假陰性，且TPELISA檢測的是梅毒螺旋體總抗體,在梅毒患者治愈后相當長時間仍為陽

7、性,因此Manavi等［14］認為不利于臨床判定是近期感染還是曾經(jīng)感染和疾病狀態(tài)。免疫PCR法檢測梅毒螺旋體是目前最敏感的一種微量分子檢測方法,應(yīng)用于檢測梅毒螺旋體特異性抗體,可直接檢查病原體的基因。史俊巖等［15］對120份梅毒血清同時進行免疫PCR和ELISA法檢測，結(jié)果免疫PCR法陽性檢出率為81.7%,而ELISA法僅為59.2%，認為在相同條件下免疫PCR法敏感度優(yōu)于ELISA法。俞偉國等［12］通過實驗比較也認為免疫PCR