健脾養(yǎng)榮片對環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的保護作用論文

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1、健脾養(yǎng)榮片對環(huán)磷酰胺致免疫功能低下小鼠的保護作用論文.freelg/kg腹腔注射復制小鼠免疫低下模型，至第9天檢測各組小鼠外周血白細胞計數(shù)、碳粒廓清實驗、骨髓有核細胞計數(shù)、脾指數(shù)和脾淋巴細胞增殖反應?！窘Y果】健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細胞數(shù)顯著高于模型組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細胞數(shù)與鯊肝醇組比較顯著升高（P＜0.05）。健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組廓清指數(shù)K顯著升高（P＜0.05）.freelg/mL；鯊肝醇片由廣東市橋制藥廠（番禺）生產(chǎn)（批號：051209），用蒸餾水溶解，稀釋成2.75mg/mL；健脾養(yǎng)榮片水煎劑由廣州

2、中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院購得飲片，用蒸餾水水煎濃縮，配制成濃度0.20、0.40、0.80g/mL；中華墨汁由北京一得閣制，使用時先高速離心去其下層液，再低速離心去其上清液，將中層液用生理鹽水配成濃度為250g/L的墨汁；RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品；脂多糖（LPS）、T細胞絲裂源刀豆蛋白A（ConA）、二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽（MTT）均為美國Sigma公司產(chǎn)品。1.3儀器722分光光度計由上海儀器分析二廠生產(chǎn)；CX21奧林巴斯光學顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)。1.4造模［2］、分組給藥NIH小鼠60只，在動物房適應飼養(yǎng)3d后，

3、將小鼠隨機分為6組：正常組，模型組，健脾養(yǎng)榮片低、中、高劑量組（劑量分別為4、8、16g·kg-1·d-1），鯊肝醇組（劑量為0.055g·kg-1·d-1），每組各10只。正常組按常規(guī)方法喂養(yǎng)，其他組小鼠均灌胃給予相應藥液4d，于第5天腹腔注射0.2g/kg環(huán)磷酰胺1次，然后繼續(xù)灌胃給藥4d。1.5小鼠血白細胞計數(shù)各組于實驗第1天（給藥前）、第5天、末次給藥（第9天）后1h分別于眼眶靜脈叢取血測定白細胞。每次取血20μL，吹入盛有0.38mL白細胞稀釋液的試管中，搖勻，將蓋玻片放在白細胞計數(shù)板正中，充液，靜置2～3min，計數(shù)白細胞，數(shù)4角大

4、方格的白細胞總數(shù)，×50即為白細胞數(shù)/mm3，再×106即轉換成標準單位×109·L-1。1.6小鼠碳粒廓清試驗［3］157于末次給藥后1h尾靜脈注入250g/L中華墨汁10mL/kg，于注射后1、5min用吸管分別從眼球后靜脈叢取血20μL，溶于1g/LNa2CO32mL溶液中搖勻，置分光光度計在波長675nm下比色，測定光密度（D）。將小鼠頸椎脫臼處死，稱取體質量，取出小鼠肝臟、脾臟，分別稱肝脾質量。按下列公式計算廓清指數(shù)K或校正廓清指數(shù)a：K=（LogD1-LogD2）/（t2-t1）;a=3K×mbody/（m肝+m脾）其中，D1、D2

5、為不同時間所取血的光密度；t2-t1為取2份血樣的時間差。1.7小鼠骨髓有核細胞計數(shù)［5］253于末次給藥后1h，頸椎脫臼處死小鼠，剝離股骨，取右肢股骨，用體積分數(shù)3%的醋酸10mL沖出骨髓內細胞，在血細胞計數(shù)板上計數(shù)4個大方格的細胞數(shù)，所得數(shù)×2.5×104，即為一根股骨中的骨髓有核細胞數(shù)。1.8小鼠脾指數(shù)實驗、脾淋巴細胞增殖反應小鼠活殺后，分別取出各組小鼠的脾臟，用扭力天平稱質量，所得值×100/體質量為脾指數(shù)（I脾）。取出脾臟后，無菌制成脾細胞懸液，并配制成5×106/mL，加入96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100μL，再分別加入完全RPMI1

6、640+ConA（5μg/mL）溶液或LPS（20μg/mL）溶液各100μL，置孵箱中培養(yǎng)72h，終止培養(yǎng)前4h摻入MMT，20μL/孔，培養(yǎng)終止時，先輕輕吸出上清，每孔再加入100μL細胞裂解液，過夜培養(yǎng)以充分溶解MMT，最后于酶標儀570nm處測D值。1.9統(tǒng)計學方法應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。2結果2.1各組小鼠白細胞計數(shù)表1結果顯示，第1天和第5天時各組小鼠外周血白細胞數(shù)比較無顯著性差異（P＞0.05）。第9天經(jīng)環(huán)磷酰胺處理后，模型組白細胞計數(shù)顯著低于正常組（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組小鼠白細胞數(shù)

7、與模型組比較顯著升高（P＜0.01），而健脾養(yǎng)榮片低劑量組則無顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、高劑量組和鯊肝醇組白細胞計數(shù)與健脾養(yǎng)榮片低劑量組比較顯著升高（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組白細胞計數(shù)顯著高于鯊肝醇組（P＜0.05）。2.2各組小鼠骨髓有核細胞計數(shù)、脾指數(shù)比較表2結果顯示，模型組與正常組比較，骨髓有核細胞計數(shù)、脾指數(shù)均顯著降低（P＜0.01）；健脾養(yǎng)榮片中劑量組與模型組比較，骨髓有核細胞計數(shù)顯著升高（P＜0.01），且高于健脾養(yǎng)榮片低劑量組與鯊肝醇組（P＜0.05），但健脾養(yǎng)榮片高劑組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.

8、05）。健脾養(yǎng)榮片中劑量組和鯊肝醇組脾指數(shù)均高于模型組（P＜0.05），健脾養(yǎng)榮片低、高劑量組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；健脾養(yǎng)榮片中、