高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地寧夏枸杞中蘆丁和綠原酸的含量論文

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1、高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地寧夏枸杞中蘆丁和綠原酸的含量論文張自萍，廖國玲，史曉文【摘要】目的建立反相高效液相色譜法同時測定寧夏枸杞中蘆丁和綠原酸含量的方法。方法色譜分析條件Shim-packVPODS色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈水乙酸（5∶94.5∶0.5）為流動相A，乙腈∶水∶乙酸（70∶29.5∶0.5）為流動相B，采用梯度洗脫，流速0.5ml·min-1.freel，柱溫30℃。結(jié)果綠原酸和蘆丁線性范圍均為10～100μg·ml-1（相關(guān)系數(shù)分別為r＝0.9995和r=0.9998），平均回收率（n＝5）分別為98

2、.6%，99.0%；不同產(chǎn)地、不同年份寧夏枸杞樣品中蘆丁和綠原酸含量存在差異。結(jié)論該方法重現(xiàn)性好，適用于同時測定枸杞中蘆丁和綠原酸的含量?！娟P(guān)鍵詞】寧夏枸杞；黃酮類化合物；高效液相色譜法；蘆??；綠原酸Abstract：ObjectiveTodevelopanRPHPLCmethodultaneousdeterminationofchlorogenicacidandrutininLyciumbarbarumL.fromdifferenthabitats.MethodsTheseparationedonaShim-packVPODS250mm×4

3、.6mm（5μm）,acetonitrile/obilephaseAandacetonitrile/obilephaseBl·min-1，thedetectionandthetemperaturel-1(r＝0.9995andr＝0.9998respectively),theaveragerecoveriesbarbarumL.fromdifferenthabitatsethodisrapidandreproducible，themethodcanbeusedtodeterminechlorogenicacidandrutininLyciumba

4、rbarumL.fromdifferenthabitats.KeybarbarumL.;Flavonoids;HPLC;Rutin;Chlorogenicacid寧夏枸杞LyciumbarbarumL.是我國傳統(tǒng)名貴藥材，具有增強免疫力、抗氧化、抗腫瘤等多方面的藥理作用［1］。黃酮類化合物是其有效成分之一，具有明顯的抗氧化作用［2，3］。張穎等［4］采用分光光度法測定了不同產(chǎn)地寧夏枸杞總黃酮含量，錢建亞等［5］報道北方枸杞LyciumchineseMill中含有蘆丁和綠原酸等黃酮類化合物，但寧夏枸杞中綠原酸和蘆丁含量的測定尚未見報道。本研究建立了

5、反相高效液相色譜法同時測定寧夏枸杞中蘆丁和綠原酸含量的方法，并用建立的分析方法，測定了不同產(chǎn)地、不同年份的寧夏枸杞中蘆丁和綠原酸的含量，為建立寧夏枸杞質(zhì)量標準提供理論依據(jù)。1器材儀器：CBM20A高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD20A檢測器，二元梯度泵，LCSolution色譜工作站，MilliQA10型純水儀（MILLIPORE），KQ500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。主要試劑：甲醇、乙腈為色譜純，其它為分析純。綠原酸、蘆丁對照品購自中國藥品生物制品檢定所。本研究選擇寧夏枸杞“寧杞Ⅰ號”2004，2005年夏季盛

6、果期果實為材料，為盡可能減小田間管理水平對枸杞品質(zhì)的影響，在采樣時盡量選擇枸杞樹齡、植株密度、水肥條件、枝條修剪水平和成熟度一致的樣品，所有枸杞樣品均由寧夏農(nóng)科院枸杞研究所鑒定，枸杞樣品來源見表1。2方法與結(jié)果2.1色譜分析條件通過對色譜柱、波長、流動相、流速、洗脫方式的選擇及優(yōu)化確定了枸杞黃酮類化合物的色譜分析條件。色譜柱：島津VPODS250mm×4.6mm（5μm）；流動相A∶乙腈∶水∶乙酸（5∶94.5∶0.5）；流動相B：乙腈：水∶乙酸（70∶29.5∶0.5）；梯度洗脫；流速0.5ml·min-1；檢測波長342nm；柱溫30℃；進

7、樣量5μl。2.2供試品制備精密稱取過16目篩的枸杞樣品2.000g，石油醚回流脫脂，在脫脂后的殘渣中加入80%乙醇30ml，60℃超聲提取兩次，30min/次，過濾合并濾液，40℃減壓濃縮。濃縮液經(jīng)HPD600型大孔樹脂，蒸餾水洗脫除去水溶性雜質(zhì)后，再用50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液50ml為供試品溶液。色譜分析時，供試品溶液過0.45μm有機系微孔濾膜。2.3對照品溶液制備精密稱取綠原酸、蘆丁對照品2.50mg于25ml容量瓶中，少量甲醇溶解，50%乙醇定容，分別制成100μg·ml-1的綠原酸、蘆丁對照品貯備溶液。2.4標準曲線繪制分別精

8、密量取100μg·ml-1的綠原酸、蘆丁對照品貯備液1.0，2.0，4.0，8.0ml置于10ml容量瓶中，50%乙醇定容，制成10，2