western blot試劑配方

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1、SDS-PAGE相關(guān)試劑、緩沖液的配置方法1.5MTris-HCl組分濃度：1.5M配制量：200ml配制方法：1.稱量下列制劑，置于250ml藍(lán)口瓶中。Tris-base36.33g2.向燒杯中加入約150ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.調(diào)pH=8.8(在磁力攪拌器上進行)，定容至200ml，4℃保存1.0MTris-HCl組分濃度：1.0M配制量：200ml配制方法：1.稱量下列制劑，置于250ml藍(lán)口瓶中。Tris-base24.22g2.向燒杯中加入約150ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.調(diào)pH=6.8(在磁力攪拌器上進行)，定容至200ml，4℃保存1.0MTris-HCl組

2、分濃度：1.0M配制量：200ml配制方法：1.稱量下列制劑，置于250ml藍(lán)口瓶中。Tris-base24.22g2.向燒杯中加入約150ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.調(diào)pH=7.5(在磁力攪拌器上進行)，定容至200ml，4℃保存10%SDS（W/V）組份濃度：10%（W/V）SDS配置量：200ml配制方法：1.稱取2gSDS。2.加入200ml的去離子水后攪拌溶解。注意：溶解定容SDS時不宜劇烈搖晃，避免產(chǎn)生過多的泡沫；10%SDS溶液在低溫是易析出晶體，可以置于70℃溶解。30%（W/V）丙烯酰胺組份濃度：30%（W/V）Acrylamide配制量：200ml配制方法：1.稱

3、量下列制劑，置于1L燒杯中。丙烯酰胺58gN-N亞甲基雙丙烯酰胺2g2.向燒杯中加入約150ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至200ml，用定性濾紙濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：丙烯酰胺具有很強的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收，其作用具有積累性，配制時應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因為有可能含有少量的未聚合成份。10%APS（W/V）組份濃度：10%（W/V）過硫酸銨配置量：1ml配制方法：1.稱取0.1g過硫酸銨。2.加入1ml的去離子水后攪拌溶解。3.貯存于-20℃注意：10%過硫酸銨溶液在-20℃保存時可使用2周左右，超過期間會失去催化作用。

4、5×電泳緩沖液組份濃度：0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%(W/V)SDS配置量：1L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris15gGlycine72gSDS5.0g2.加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。3．加去離子水將溶液定容到1L后，4℃保存。轉(zhuǎn)印緩沖液組份濃度：0.125MTris,1.25MGlycine,配置量：1L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。Tris3gGlycine14.4g甲醇200ml2.加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。3．加去離子水將溶液定容到1L后，室溫保存?？捡R氏亮藍(lán)染色液組份濃度：0.25%（W/V）考馬

5、氏亮藍(lán)45%（V/V）甲醇10%（V/V）冰乙酸配制量：100ml配制方法：1.稱量0.25g考馬氏亮藍(lán)，置于燒杯中2.量取45ml的甲醇加入上述燒杯，攪拌溶解3.加入10ml乙酸，攪拌均勻。4.加入45ml去離子水，攪拌均勻。5.用濾紙出去顆粒物質(zhì)后，室溫保存考馬氏亮藍(lán)脫色液組份濃度：10%（V/V）冰乙酸45%（V/V）甲醇配制量：100ml配制方法：1.稱量下列溶液，置于燒杯中冰乙酸10ml甲醇45ml去離子水45ml2.充分混勻后使用5×上樣緩沖液配置量：10ml配制方法：1.稱量下列試劑，置于100ml血清瓶中。1MTris-HCl(pH=6.8)0.6ml甘油2.5ml10%S

6、DS2ml巰基乙醇0.5ml溴酚藍(lán)0.01g去離子水4.4ml2.混勻后1ml分裝于指形管中，-20℃保存。TBST組份濃度：配制量：1L配制方法：1.稱量下列制劑，置于1L燒杯中。1MTris-HCl(pH=7.5)：10mlNaCl：5.8g2.加去離子水將溶液定容至1L。3.加500μlTween-20，磁力攪拌器混勻。