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1、高效液相色譜法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇的含量鄧鵬謝一輝張葉青余無(wú)雙【摘要】 目的建立安痛藤中羽扇豆醇含量的測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為diamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，流動(dòng)相為甲醇∶水=98∶2,流速1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)206nm，柱溫為30℃。結(jié)果羽扇豆醇在0.316～3.16μg范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系,r=0.9995，平均回收率為97.82%，RSD為2.49%。結(jié)論該方法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇含量快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠?！娟P(guān)鍵詞】
2、高效液相色譜安痛藤羽扇豆醇 安痛藤為葡萄科白粉藤屬植物苦朗藤Cissusassamica(LaonsilC18(5μm，250mm×4.6mm;DIKMA公司)；KQ3200型超聲儀；羽扇豆醇對(duì)照品(自制,歸一化含量99.80%)；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水；安痛藤藥材采于江西贛南地區(qū)，由江西中醫(yī)學(xué)院劉慶華老師鑒定為葡萄科白粉藤屬植物苦朗藤Cissusassamica(LaonsilC18(5μm,250mm×4.5mm)色譜柱,甲醇∶水(98∶2)為流動(dòng)相,柱溫30℃,流速1ml·
3、min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)206nm；羽扇豆醇對(duì)照品進(jìn)樣量和安痛藤供試液進(jìn)樣量20μl。在上述色譜條件下,羽扇豆醇與其它成分分離良好,理論塔板數(shù)以羽扇豆醇峰計(jì)算不低于5000；分離度接近于1.5,基本實(shí)現(xiàn)基線分離。結(jié)果見(jiàn)圖1～2?！ ?.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取羽扇豆醇對(duì)照品適量，置于25ml量瓶中,加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（0.158mg/ml）?！ ?.3供試品溶液的制備取安痛藤粉末(過(guò)60目)約2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40ml，稱(chēng)定重量，超聲30min，放冷，稱(chēng)定重量
4、，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，用氯仿溶解(2，2，1ml)，合并氯仿液上1.5g硅膠柱，用氯仿洗脫，收集洗脫液8ml，蒸干，用甲醇溶解并定容至2ml，0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得?！ D1羽扇豆醇對(duì)照品色譜圖（略） 圖2安痛藤供試液色譜圖（略） 2.4線性關(guān)系的考察精密吸取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8，10ml置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成濃度為15.8，31.6，63.2，94.8，126.4，158μg·ml-1羽扇豆醇對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣
5、20μl。以羽扇豆醇的質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=383.54X+26.066，r=0.9995。結(jié)果表明，羽扇豆醇在0.316～3.16μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系?！ ?.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取安痛藤約2g，精密稱(chēng)定，按供試液制備項(xiàng)制備供試液，進(jìn)樣20μl/次，共6次，分別在0，4，8，12，16，24h進(jìn)樣并記錄峰面積值。計(jì)算結(jié)果顯示：6次羽扇豆醇含量測(cè)定結(jié)果基本不變，平均值為0.0162%，RSD=1.20%，表明供試液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定?！ ?.6精密度實(shí)驗(yàn)精
6、密吸取安痛藤供試液，連續(xù)進(jìn)樣6次，20μl/次，6次進(jìn)樣測(cè)得羽扇豆醇含量平均結(jié)果為0.0163%,RSD=1.33%，表明本實(shí)驗(yàn)方法精密度良好?！ ?.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取安痛藤粉末6份，每份約2g，精密稱(chēng)定，按供試液制備項(xiàng)制備供試液，進(jìn)樣20μl，記錄峰面積值。6份樣品羽扇豆醇含量平均值為0.0160%，RSD=2.41%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好?！ ?.8加樣回收實(shí)驗(yàn)取安痛藤粉末(過(guò)60目)6份，每份約2g，精密稱(chēng)定，按供試液制備項(xiàng)制備，在“精密吸取續(xù)濾液20ml”后分別精密加入羽扇豆醇對(duì)照品溶
7、液1ml（含羽扇豆醇為0.1223mg），繼續(xù)制得供試液。進(jìn)樣20μl/次，每份供試品溶液進(jìn)樣3次。結(jié)果見(jiàn)表1?！ 〗Y(jié)果顯示，用HPLC法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇的含量，回收率結(jié)果令人滿(mǎn)意?！ ?.9系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)選擇了3種色譜柱：DiamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，HypersilODS2(5μm，250mm×4.6mm,大連依利特)色譜柱和EclipseXDB-C18(5μm，250mm×4.6mm，安捷倫公司)色譜柱，按本法測(cè)定安痛藤藥材中羽扇豆醇的含量，測(cè)定結(jié)果基本一致，均值
8、為0.0162%,RSD為2.49%。表明本法適應(yīng)性較好?！ ”?加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略） 2.10樣品的含量測(cè)定取不同采收期的安痛藤樣品按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣量20μl，測(cè)定供試品中羽扇豆醇的含量。結(jié)果見(jiàn)表2?！ ”?安痛藤不同采收期羽扇豆醇的含量測(cè)定（略） 結(jié)果顯示，不同采收期安痛藤樣品中的羽扇豆醇含量存在較大的差異。由于樣品來(lái)源于山區(qū)，受到人為因素的影響較小，主要影響因素可能在于日曬與水分等自然條件。2004,200
