小麥葉片生理指標(biāo)測定

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1、小麥葉片生理指標(biāo)測定一、種子處理：1、0.1%氯化汞浸泡小麥種子30分鐘，進行消毒，小麥種子放在較大的培養(yǎng)皿中2、將氯化汞倒入廢液瓶，注意必須戴兩層手套，因為氯化汞劇毒，且用完的手套不能碰實驗室里其它的任何東西，以防污染，最好把用完的手套放到DNA顯色室中的廢手套收集桶里；3、然后用無菌蒸餾水沖洗3遍以上4、最后用倒入適量無菌水（稍微讓水浸沒種子表面）進行種子萌發(fā)，每天換次新水。二、小麥培養(yǎng)1、在種子發(fā)芽以后，在芽長1cm左右的時候，將種子放入用網(wǎng)縫好的塑料泡沫上，然后放入裝有自來水的培養(yǎng)盒中2、大概三天左右的時間，將水倒掉，

2、換上1/2hoagland營養(yǎng)液（配方見下面的附件），每三天換一次營養(yǎng)液。三、小麥處理及指標(biāo)測定1、小麥培養(yǎng)兩周后，在兩葉一心期，用適當(dāng)PEG6000濃度的1/2hoagland營養(yǎng)液換掉原營養(yǎng)液，各設(shè)一個對照（即沒加PEG6000的1/2hoagland營養(yǎng)液）2、每隔24h取一次樣，在72h后復(fù)水（即將PEG6000溶液倒掉，換成新配的1/2hoagland營養(yǎng)液）四、生理指標(biāo)測定1、相對含水量測定⒈鮮重測定迅速剪取植物材料，裝入已知重量的容器（或塑料袋）中，帶入室內(nèi)，用分析天平稱取鮮重（FW）。⒉飽和鮮重測定將稱過鮮重的

3、植物材料浸入水中，數(shù)小時后取出，用吸水紙吸干表面水分，立即稱重；再次將材料放入水中浸泡一段時間后，再次取出，吸干表面水分，稱鮮重，直到兩次稱重的結(jié)果基本相等，最后的結(jié)果即為飽和鮮重（SFW）。若事先已知達(dá)到水分飽和所用的時間，則可一次取得飽和鮮重的測量定值。⒊干重測定提前把烘箱打開，溫度升至120℃。把稱過鮮重的植物材料裝入紙袋中，放入烘箱內(nèi)，120℃殺青10min，然后把烘箱的溫度降到70℃左右，烘至恒重。取出紙袋和材料，放入干燥器中冷卻至室溫，稱干重（DW）。⒋取得以上數(shù)據(jù)后，按公式相對含水量。相對含水量=FW-DW/SF

4、W-DW2、MDA含量測定一、目的通過實驗，掌握植物體內(nèi)丙二醛含量測定的原理及方法。二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境條件下受傷害，其組織或器官膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)而產(chǎn)生的。它的含量與植物衰老及逆境傷害有密切關(guān)系。測定植物體內(nèi)丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性條件下加熱與組織中的丙二醛產(chǎn)生顯色反應(yīng)，生成紅棕色的三甲川（3、5、5－三甲基惡唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長在

5、450nm處，在532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中丙二醛與硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物含量時一定要排除可溶性糖的干擾。此外在532nm波長處尚有非特異的背景吸收的影響也要加以排除。低濃度的鐵離子能顯著增加硫代巴比妥酸與蔗糖或丙二醛顯色反應(yīng)物在532、450nm處的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛與硫代巴比妥酸顯色反應(yīng)中需要有一定的鐵離子，通常植物組織中鐵離子的含量為100－300μg·g－1Dw，根據(jù)植物樣品量和提取液的體積，加入Fe3＋的終濃度為0.5nmol·L－1。在532nm

6、、600nm和450nm波長處測定吸光度值，即可計算出丙二醛含量。三、材料、儀器設(shè)備及試劑1.材料：植物葉片。2.儀器設(shè)備：離心機，分光光度計；電子分析天平；恒溫水浴；研缽；試管；移液管（1ml、5ml）、試管架；移液管架；洗耳球；剪刀。3.試劑：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。四、實驗步驟1.丙二醛的提取稱取受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫的植物葉片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至勻漿，再加8ml10％三氯乙酸進一步研磨，勻漿以4000r/min離心10min，其上清液為丙二醛提取液

7、。2.顯色反應(yīng)及測定取4支干凈試管，編號，3支為樣品管（三個重復(fù)），各加入提取液2ml，對照管加蒸餾水2ml，然后各管再加入2ml0.6％硫代巴比妥酸溶液。搖勻，混合液在沸水浴中反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。取上清液分別在532、600和450nm波長下測定吸光度（A）值。五、丙二醛含量計算：由于蔗糖－TBA反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長為450nm，毫摩爾吸收系數(shù)為85.4×10－3，MDA－TBA反應(yīng)產(chǎn)物在532nm的毫摩爾吸收系數(shù)分別是7.4×10－3和155×10－3。532nm非特異性吸光值可以600nm波長處的吸光值代

8、表。按雙組分分光光度法原理，建立方程組，解此方程組即可求出MDA及可溶性糖濃度。方程組：A450=（85.4×10－3）·C糖（A532－A600）=（155×10－3）·CMDA+（7.4×10－3）·C糖解得：A450C糖=——————=11.71A450（mmol·L－