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1、益腎填精、補(bǔ)鈣壯骨中藥復(fù)方對(duì)骨形成蛋白【摘要】目的研究益腎填精、補(bǔ)鈣壯骨中藥復(fù)方對(duì)骨形成蛋白-4(BMP-4)誘導(dǎo)成骨信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的調(diào)控作用。方法將雌性P-4和Smad5、6mRNA表達(dá)。結(jié)果與模型空白組比較,中藥復(fù)方各劑量組股骨骨密度顯著升高(P<0.01);骨組織BMP-4、Smad5mRNA表達(dá)水平明顯升高(P<0.01),Smad6mRNA表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)。結(jié)論益腎填精、補(bǔ)鈣壯骨中藥復(fù)方可明顯上調(diào)BMP-4和Smad5mRNA表達(dá),下調(diào)Smad6mRNA表達(dá)?!娟P(guān)鍵詞】骨質(zhì)疏松癥;骨形成蛋白-4;信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);Smads蛋白Abstrac
2、t:ObjectiveTostudytheregulatingeffectofplementingcalciumandinvigoratingkidneymethodonthebonemorphogeicprotein-4(BMP-4)andsignaltransductionmechanism.MethodsFemaleD)offemoralboneinvitroeterandtheexpressionofBMP-4andSmad5,6mRNAerasechainreation(RT-PCR).Resultsparedodelrats,BMDoffemor
3、alboneinChinesemedicinegroups(highdose,middledose,load5mRNAincreasedobviously(P<0.01),andtheexpressionofSmad6mRNAdecreasedobviously(P<0.01).ConclusionsNanometercalciumandinvigoratingkidneyChinesemedicinecanincreasetheexpressionofBMP-4andSmad5mRNA,anddecreasetheexpressionofSmad6mRNA
4、.Keyorphogeicprotein-4;signaltransduction;Smadsprotein骨質(zhì)疏松癥是一種全身代謝性疾病,其病理機(jī)制十分復(fù)雜,是由多種細(xì)胞、激素和生長(zhǎng)因子參與、互相交織而成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。骨局部生長(zhǎng)因子以自分泌和旁分泌的形式直接作用于骨細(xì)胞,能促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化及基質(zhì)合成,對(duì)骨折修復(fù)的啟動(dòng)、發(fā)育、調(diào)控及塑形均有重要作用[1]。在眾多骨生長(zhǎng)因子中,骨形成蛋白(BMP)最受矚目,它與骨誘導(dǎo)關(guān)系最為密切。在BMPs誘導(dǎo)骨形成過(guò)程中,BMP-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是最主要的信號(hào)通路。本研究通過(guò)檢測(cè)去卵巢大鼠BMP-4及其受體調(diào)節(jié)性Smad
5、5、抑制性Smad6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子的基因表達(dá)變化,探討益腎填精、補(bǔ)鈣壯骨中藥復(fù)方對(duì)BMPs誘導(dǎo)成骨信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的調(diào)控作用。現(xiàn)報(bào)道如下。 1實(shí)驗(yàn)材料 1.1動(dòng)物雌性arker(TaKaRa公司),BMP-4,Smad5、6,β-actin引物(由TaKaRa公司合成),TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0試劑盒(TaKaRa公司)?! ?.3儀器XR-36型雙能X線骨密度儀(美國(guó),NORLAND),BiometraPCR擴(kuò)增儀(德國(guó)),DU640核酸蛋白分析儀(美國(guó),Beckman),ChemiImager5500凝膠電泳成像分析系統(tǒng)(美國(guó)
6、,AlphaInnotech)?! ?.4藥物益腎填精、補(bǔ)鈣壯骨中藥復(fù)方制備:取長(zhǎng)山島大連灣牡蠣,洗凈,曬干。采用納米制備技術(shù)粉碎,最終平均粒徑達(dá)到780nm左右,小于100nm的粒徑占10%左右。在制備過(guò)程中采取封閉和在線監(jiān)測(cè)等措施避免顆粒污染和保證合適的顆粒尺寸分布。所得牡蠣鈣微粒與補(bǔ)腎中藥(鹿茸等)微粉按照1∶1的比例混合,即得本實(shí)驗(yàn)用中藥復(fù)方。牡蠣碳酸鈣咀嚼片(東盛科技啟東蓋天力制藥股份有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字:H32025394)。骨疏康顆粒(東港市康辰制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字:ZF20000347)?! ?實(shí)驗(yàn)方法 2.1分組及造模將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按體重分層
7、隨機(jī)分為7組:正常組、模型空白組、牡蠣鈣補(bǔ)腎中藥復(fù)方低劑量組、牡蠣鈣補(bǔ)腎中藥復(fù)方中劑量組、牡蠣鈣補(bǔ)腎中藥復(fù)方高劑量組、骨疏康顆粒組、牡蠣碳酸鈣咀嚼片組(以下簡(jiǎn)稱為正常組、??战M、實(shí)驗(yàn)低劑量組、實(shí)驗(yàn)中劑量組、實(shí)驗(yàn)高劑量組、骨疏康組、牡蠣碳酸鈣組),每組15只。除正常組外,余者進(jìn)行造模處理,大鼠經(jīng)腹腔注射鹽酸氯胺酮0.2mL/250g進(jìn)行麻醉,將之以俯臥姿勢(shì)固定于自制手術(shù)架上,從大鼠髂嵴頂部外上方1cm左右,腰椎骶棘肌兩側(cè)入路切除大鼠雙側(cè)卵巢,術(shù)后肌肉注射青霉素0.4mL/250g,連續(xù)3d。 2.2給藥造模10d后開(kāi)始給藥。實(shí)驗(yàn)低劑量組給藥量為每日0.7g/
8、kg,實(shí)驗(yàn)中劑量組為每日2.1g/kg,實(shí)驗(yàn)高劑量組