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《眼斑芫菁全長cDNA文庫的構建及EST序列分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、重慶大學碩士學位論文中文摘要摘要眼斑芫菁俗稱黃黑小斑蝥（MylabrisCichoriiLinnaeus），屬于昆蟲綱鞘翅目芫菁科（Coleopter：Meloidae）昆蟲，是中國藥典收錄的重要的動物藥之一，近年來因其體內(nèi)所含的斑蝥素（Cantharidin）在臨床醫(yī)學中有顯著的抗腫瘤作用而使這一資源昆蟲的需求量大為增加，野生資源遠不能滿足人類需求。目前，對于芫菁科昆蟲的人工養(yǎng)殖、斑蝥素的合成及應用等已有許多研究成果，但是，關于芫菁科昆蟲的生理學、生物化學以及分子生物學方面的研究極為缺乏，有的領域完全是空白，對芫菁科昆蟲在斑蝥素合成高峰期基因轉錄信息的研究能獲取分子昆蟲學方面的重要信息
2、，為研究芫菁科昆蟲的滯育、斑蝥素生物合成過程等相關研究開辟新的道路，為實現(xiàn)芫菁的人工養(yǎng)殖、更好地挖掘芫菁資源乃至斑蝥素的人工合成奠定基礎。本實驗以羽化后25天左右的隔離飼養(yǎng)的雌、雄眼斑芫菁為材料，提取全蟲的mRNA，經(jīng)過反轉錄合成ss-cDNA，再經(jīng)過LD-PCR技術合成ds-cDNA，取200bp以上的ds-cDNA與載體進行連接，連接產(chǎn)物電轉化XL1-Blue大腸桿菌感受態(tài)細胞，構建了眼斑芫菁雌、雄成蟲的全長cDNA文庫。從兩個文庫各隨機挑取30個克隆進行測序，經(jīng)過處理最終共得到34條ESTs（Expressedsequencetags）序列，經(jīng)過與數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)其中包括參與眼斑芫菁
3、重要生理功能的基因。主要研究結果如下：①成功構建了眼斑芫菁雌、雄成蟲的cDNA文庫，經(jīng)檢驗文庫質(zhì)量符合要求，可以用來進行下一步的研究。②從兩個cDNA文庫中獲得了部分EST序列，經(jīng)過初步比對發(fā)現(xiàn)兩個cDNA文庫獲得的EST序列在長度、預測功能等方面沒有顯著差異。合并雌、雄蟲EST序列進行處理，再采用BlastX和BlastN程序與GeneBank數(shù)據(jù)庫進行比對，有41%的序列與數(shù)據(jù)庫中的已登錄的基因序列有較高相似性，而有59%的EST序列與數(shù)據(jù)庫中已登錄序列相似性較低。說明眼斑芫菁有著比較獨特的基因序列，而構建文庫是發(fā)現(xiàn)新基因的高效的方法。其中包括細胞色素C氧化酶等對于研究眼斑芫菁生理生
4、化具有重要意義的基因序列（序列檢索號：GW342329至GW342333）。③以眼斑芫菁細胞色素C氧化酶亞基Ⅰ的基因序列為基礎構建了系統(tǒng)進化樹，證明鞘翅目芫菁科與鞘翅目葉甲科親緣關系較近，鞘翅目與鱗翅目親緣關系較近，這個結果與傳統(tǒng)的昆蟲分類方法相一致。關鍵詞：眼斑芫菁，斑蝥素，SMART，cDNA文庫，EST序列I重慶大學碩士學位論文英文摘要ABSTRACTMylabrisCichoriiLinnaeus(Coleoptera:Meloidae)isanimportantChinesetraditionalmedicinelistedinthe5、ple'sRepublicofChina>editedin2005(abbreviatedastheChinesePharmacopoeia;Ch.P.,2005)whichpotentcontentcantharidinishighlypoisonoustomostofanimals.Foritsextensiveusinginmedicine,therequirementhasupincreasedandthenaturalresourcesofMylabrisCichoriihavebeendramaticallydecreasedinChina.Therearealotofres
6、earchesachievedabouttherearingofMeloidaeinsects,cantharidinsynthesisandapplication.However,ithaslittleresearchaboutMeloidaephysiology,biochemistryandmolecularbiology,andevencompletelyblankinsomefield.Itstranscriptomicdataofcrest-timeofcantharidinbiosynthesiswouldprovideinvaluableinformationformol
7、ecularentomologyandpaveawayforthereserchofdiapauseofMeloidaeinsects,cantharidinbiosynthesisandsoon,anditwouldmakefoundationforachievingtheartificialbreedingofMeloidaeinsects,betterutilizationtheresourcesofcantharidinev
