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《trps1調(diào)控膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、Trps1調(diào)控膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究程哲，田駒，鄭樹國（400038重慶，第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍肝膽外科研究所）[摘要]目的觀察體外模擬冷保存再灌注損傷（coldpreservationreperfusioninjury，CPRI）誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞（humanintrahepaticbiliaryepithelialcells，HIBECs）發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）的現(xiàn)象，并探討毛發(fā)鼻指（趾）綜合征1型相關(guān)基因（tricho-rhino-ph
2、aryngealsyndrometype1，Trps1）在該過程中的作用。方法先將HIBECs置于4℃UW液中缺氧保存12、24、48h后，再轉(zhuǎn)移至37℃正常含血清培養(yǎng)基中孵育1h，分別模擬CPRI冷保存和再灌注兩個階段，PCR及Westernblot檢測上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMA及目標(biāo)基因Trps1的表達(dá)，并分析Trps1與上皮、間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)間的相關(guān)性；然后用含Trps1基因全長腺病毒或Trps1siRNA轉(zhuǎn)染HIBECs上調(diào)或干擾Trps1表達(dá)，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，探討Trps1
3、對HIBECsEMT的調(diào)控作用。結(jié)果結(jié)果應(yīng)和方法相對應(yīng)。注意表述時的歸納總結(jié)，并突出實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果；體外模擬CPRI處理HIBECs，冷保存≤12h，細(xì)胞內(nèi)Trps1表達(dá)增加，隨冷保存時間延長持續(xù)減少（P＜0.05）；同時，上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)持續(xù)減少（P＜0.05），間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)持續(xù)增加（P＜0.05），相關(guān)分析顯示在該過程中，Trps1與上皮標(biāo)志物表達(dá)正相關(guān)r=?（P＜0.01），而與間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。含Trps1基因全長腺病毒轉(zhuǎn)
4、染HIBEC后，重復(fù)上述CPRI誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)，上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)增加（P＜0.05），間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)減少（P＜0.05），CPRI誘導(dǎo)HIBECsEMT效應(yīng)受到抑制；Trps1siRNA轉(zhuǎn)染HIBECs后，上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)減少（P＜0.05），間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)增加（P＜0.05），促進(jìn)CPRI誘導(dǎo)HIBECsEMT效應(yīng)。結(jié)論體外模擬CPRI可誘導(dǎo)HIBECs發(fā)生EMT，Trp
5、s1參與調(diào)控HIBECsEMT，發(fā)揮重要的拮抗作用并可能逆轉(zhuǎn)該過程。[關(guān)鍵詞]Trps1；膽管上皮細(xì)胞；上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化；冷保存再灌注損傷[中圖法分類號]R361+.3;R394.3;R657.4+6[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]ATrps1regulatesepithelial-mesenchymaltransitionofintrahepaticbiliaryepithelialcellsChengZhe,TianJu,ZhengShuguo（InstituteofHepatobiliarySurgery,SouthwestHospital,Th
6、irdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,China,400038,China）[Abstract]ObjectiveToobservetheepithelial-mesenchymaltransition(EMT)ofhumanintrahepaticbiliaryepithelialcells(HIBECs)inducedbycoldpreservationreperfusioninjury(CPRI),andtostudytheroleoftricho-rhino-pharyngealsyn
7、drometype1(Trps1)intheoccurrenceofHIBECs’EMT.MethodsFirstHIBECswereplacedin4℃UWsolutionfor12,24,48hours,thenwereincubatedin37℃normalserum-containingmediumfor1hour,respectivelysimulatingthecoldpreservationstageandthereperfusionstageofCPRI.ExpressionsofE-cadherin,CK19,Vi
8、mentin,α-SMAandthetargetgeneTrps1inHIBECsweredetectedbyRT-PCRandWesternblottingaftertreatmentofHIBECswithCPRI,andthec
