trps1調(diào)控膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究

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1、Trps1調(diào)控膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究程哲,田駒,鄭樹國(guó)(400038重慶,第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍肝膽外科研究所)[摘要]目的觀察體外模擬冷保存再灌注損傷(coldpreservationreperfusioninjury,CPRI)誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞(humanintrahepaticbiliaryepithelialcells,HIBECs)發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的現(xiàn)象,并探討毛發(fā)鼻指(趾)綜合征1型相關(guān)基因(tricho-rhino-ph

2、aryngealsyndrometype1,Trps1)在該過(guò)程中的作用。方法先將HIBECs置于4℃UW液中缺氧保存12、24、48h后,再轉(zhuǎn)移至37℃正常含血清培養(yǎng)基中孵育1h,分別模擬CPRI冷保存和再灌注兩個(gè)階段,PCR及Westernblot檢測(cè)上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19,間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMA及目標(biāo)基因Trps1的表達(dá),并分析Trps1與上皮、間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)間的相關(guān)性;然后用含Trps1基因全長(zhǎng)腺病毒或Trps1siRNA轉(zhuǎn)染HIBECs上調(diào)或干擾Trps1表達(dá),重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),探討Trps1

3、對(duì)HIBECsEMT的調(diào)控作用。結(jié)果結(jié)果應(yīng)和方法相對(duì)應(yīng)。注意表述時(shí)的歸納總結(jié),并突出實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果;體外模擬CPRI處理HIBECs,冷保存≤12h,細(xì)胞內(nèi)Trps1表達(dá)增加,隨冷保存時(shí)間延長(zhǎng)持續(xù)減少(P<0.05);同時(shí),上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)持續(xù)減少(P<0.05),間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)持續(xù)增加(P<0.05),相關(guān)分析顯示在該過(guò)程中,Trps1與上皮標(biāo)志物表達(dá)正相關(guān)r=?(P<0.01),而與間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)負(fù)相關(guān)(P<0.01)。含Trps1基因全長(zhǎng)腺病毒轉(zhuǎn)

4、染HIBEC后,重復(fù)上述CPRI誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)增加(P<0.05),間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)減少(P<0.05),CPRI誘導(dǎo)HIBECsEMT效應(yīng)受到抑制;Trps1siRNA轉(zhuǎn)染HIBECs后,上皮標(biāo)志物E-cadherin、CK19mRNA和蛋白表達(dá)減少(P<0.05),間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、α-SMAmRNA和蛋白表達(dá)增加(P<0.05),促進(jìn)CPRI誘導(dǎo)HIBECsEMT效應(yīng)。結(jié)論體外模擬CPRI可誘導(dǎo)HIBECs發(fā)生EMT,Trp

5、s1參與調(diào)控HIBECsEMT,發(fā)揮重要的拮抗作用并可能逆轉(zhuǎn)該過(guò)程。[關(guān)鍵詞]Trps1;膽管上皮細(xì)胞;上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化;冷保存再灌注損傷[中圖法分類號(hào)]R361+.3;R394.3;R657.4+6[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]ATrps1regulatesepithelial-mesenchymaltransitionofintrahepaticbiliaryepithelialcellsChengZhe,TianJu,ZhengShuguo(InstituteofHepatobiliarySurgery,SouthwestHospital,Th

6、irdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,China,400038,China)[Abstract]ObjectiveToobservetheepithelial-mesenchymaltransition(EMT)ofhumanintrahepaticbiliaryepithelialcells(HIBECs)inducedbycoldpreservationreperfusioninjury(CPRI),andtostudytheroleoftricho-rhino-pharyngealsyn

7、drometype1(Trps1)intheoccurrenceofHIBECs’EMT.MethodsFirstHIBECswereplacedin4℃UWsolutionfor12,24,48hours,thenwereincubatedin37℃normalserum-containingmediumfor1hour,respectivelysimulatingthecoldpreservationstageandthereperfusionstageofCPRI.ExpressionsofE-cadherin,CK19,Vi

8、mentin,α-SMAandthetargetgeneTrps1inHIBECsweredetectedbyRT-PCRandWesternblottingaftertreatmentofHIBECswithCPRI,andthec

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