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《il1β對體外海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、汕頭大學(xué)碩士研究生論文目錄目錄…………………………………………………………………………………Ⅰ中文摘要……………………………………………………………………………Ⅱ英文摘要……………………………………………………………………………Ⅸ縮略詞………………………………………………………………………………ⅩⅥ一、前言………………………………………………………………………………1二、材料和方法…………………………………………………………………………4三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果………………………………………………………………………12四、討論…………………………………………………
2、………………………29五、總結(jié)…………………………………………………………………………37參考文獻(xiàn)……………………………………………………………………………38文獻(xiàn)綜述…………………………………………………………………………41個(gè)人簡歷………………………………………………………………………………47致謝………………………………………………………………………………48I汕頭大學(xué)碩士研究生論文摘要背景和目的抑郁的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，關(guān)于抑郁的病因也有很多種理論假說，其中海馬神經(jīng)元的損傷和再生障礙在抑郁的發(fā)病過程中越來越受重視。海馬是大腦中神經(jīng)元可再生的重要區(qū)
3、域之一，海馬中的神經(jīng)干細(xì)胞(Neuralstemcells,NSCs)是神經(jīng)元的前體細(xì)胞，對于神經(jīng)元的數(shù)量再生與維持有重要影響。體外實(shí)驗(yàn)表明炎性細(xì)胞因子白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)能抑制海馬神經(jīng)祖細(xì)胞的增殖，因此，研究IL-1β在抑郁癥發(fā)病過程中的作用和機(jī)制，不僅有利于揭示抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，也將為開發(fā)新型抗抑郁藥物提供新的靶點(diǎn)。本課題組前期的研究成果證明：腹腔注射脂多糖、腹腔注射利血平均可引起大鼠的行為性抑郁，同時(shí)腦內(nèi)不同區(qū)域的細(xì)胞因子IL-1β的升高，腦內(nèi)注射IL-1β受體拮抗劑可以部分改善這種行為性抑郁，給予腺苷受
4、體拮抗劑咖啡因和A2A受體拮抗劑可以部分逆轉(zhuǎn)這種行為性抑郁；腦室內(nèi)注射IL-1β可以誘導(dǎo)大鼠的行為性抑郁；體外IL-1β能劑量依賴性的抑制海馬神經(jīng)元的活性，降低BDNF表達(dá),CREB-BDNF通路可能在其中有著至關(guān)重要的作用，NMDAR可能參與其中。上述研究表明IL-1β與行為性抑郁有著密切的關(guān)系，關(guān)于其分子生物學(xué)機(jī)制可能與抑制腦源性神經(jīng)生長因子﹙BDNF)的表達(dá)降低有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步探究IL-1β對于神經(jīng)元的前體細(xì)胞－神經(jīng)干細(xì)胞活性的影響及其機(jī)制，并研究A2A受體及NMDA受體在其中的作用，以及IL-1β對于神經(jīng)干細(xì)胞分化成神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的影
5、響。材料和方法1.海馬神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定24h內(nèi)SD大鼠新生鼠3－4只，斷頭取腦，分離兩側(cè)海馬，機(jī)械吹打成為單細(xì)胞懸液，加入含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液，置入37℃、5％CO2培養(yǎng)箱30min，去除為成纖維細(xì)胞，24h后棄掉上清液，重新加入含10%FBS的DMEM/F12新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)72h，離心II汕頭大學(xué)碩士研究生論文棄掉上清液，換用神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液(含2%B27、20ng/mlbFGF及20ng/mlEGF的DMEM/F12培養(yǎng)液)，3－4天換液，7－8天傳代一次。連續(xù)純化培養(yǎng)約21天，以作實(shí)驗(yàn)用材。神經(jīng)干細(xì)胞高度選擇性單克隆抗體N
6、estin(巢蛋白)行免疫細(xì)胞化學(xué)﹙immunocytochemistry,ICC)鑒定。2.IL-1β對神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制以IL-1β孵育神經(jīng)干細(xì)胞3天換液并取出一半細(xì)胞，測細(xì)胞活性。剩余細(xì)胞再補(bǔ)足新鮮培養(yǎng)液及藥物繼續(xù)孵育3天取出全部的細(xì)胞，MTT法測細(xì)胞活性。以不同濃度的IL-1β孵育神經(jīng)干細(xì)胞3天，收集上清液以ELISA試劑盒測其上清液中的BDNF濃度。以10ng/mlIL-1β孵育神經(jīng)干細(xì)胞，同時(shí)加入NMDA受體拮抗劑MK-801或者A2A受體拮抗劑MSX-3，共同孵育3天，取出全部的細(xì)胞，MTT法測細(xì)胞活性。3.咖啡因及NGF對神經(jīng)干
7、細(xì)胞增殖的影響以咖啡因,NGF孵育神經(jīng)干細(xì)胞3天，換液并取出一半細(xì)胞，測細(xì)胞活性。剩余細(xì)胞再補(bǔ)足新鮮培養(yǎng)液及藥物，繼續(xù)孵育3天取出全部的細(xì)胞，MTT法測細(xì)胞活性。4.IL-1β對神經(jīng)干細(xì)胞分化成星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的影響多聚賴氨酸鋪板，調(diào)整神經(jīng)干細(xì)胞的密度，10%FBS+正常神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液加入不同實(shí)驗(yàn)濃度IL-1β(0、5、10、20)ng/ml分化3天，換液繼續(xù)分化培養(yǎng)，共6天，去除上清液，分別用GFAP和β－TubulinⅢ行熒光免疫細(xì)胞化學(xué)染色計(jì)數(shù)以及用流式細(xì)胞儀檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的比例。5.統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用Excel2003和SPSS17.
8、0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示，采用方差分析進(jìn)行比較，以P＜=0.
