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《lactoferricin+b基因和幾種變異克隆的構(gòu)建及其在釀酒酵母中的表達(dá)和鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、四川I大學(xué)碩士學(xué)位論文聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本學(xué)位論文成果是本人在四川大學(xué)讀書期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的，論文成果歸四Jtl；k學(xué)所有，特此聲明。申請(qǐng)人：指導(dǎo)教師：馮永礴御灑網(wǎng)川大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要LactoferricinB基因與幾種變異克隆的構(gòu)建及其在釀酒酵母S．cerevisiae中的表達(dá)與鑒定研究生
2、馮永潛導(dǎo)師翟朝陽教授目的構(gòu)建牛乳鐵多肽(LactoferricinB)的真核表達(dá)質(zhì)粒pYES2／LactoferricinB，實(shí)現(xiàn)其在釀酒酵母S．cerev婦iae中的表達(dá)，初步檢測(cè)其不同變異的體外抗菌活性。方法通過分別合成LactoferricinB基因兩條單鏈的部分序列，讓其互為模板、引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到LactoferrieinB與幾種變異的基因序列。將它們克隆到穿梭質(zhì)粒pYES2中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pYES2／LactoferricinB等，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌ToplO中，讓其大量增殖。提取目的質(zhì)粒經(jīng)純化后將轉(zhuǎn)化到S．cerevisiae中，通過營養(yǎng)缺陷型篩選獲得重組酵母菌并通過半乳糖誘
3、導(dǎo)使其表達(dá)目的蛋白。經(jīng)離子交換柱純化收集目的蛋白后，通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)比較其抗菌活性。結(jié)果提取含該片段的重組質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增檢驗(yàn)、DNA測(cè)序表明，所得幾種質(zhì)粒分別包含了LaetoferrieinB與幾種變異的基因序列，即成功構(gòu)建了目的載體。提取誘導(dǎo)后的蛋白進(jìn)行SDS．PAGE電泳及質(zhì)譜檢測(cè)，證實(shí)目的蛋白的存在。抑菌實(shí)驗(yàn)初步檢測(cè)目的蛋白具有一定的體外抑菌活性。結(jié)論構(gòu)建了重組質(zhì)粒pYES2／LactoferricinB等，能夠在S．cereviMae中誘導(dǎo)表達(dá)，獲得分子量約為3．4KD的LactoferdcinB重組蛋白，為進(jìn)一步研究其生物功能及抗菌活性提供了幫助。關(guān)鍵詞抗菌肽Laetoferri
4、cinB基因序列變異酵母表達(dá)朗川大學(xué)碗t學(xué)位論文AbstractCloningandVerificationofLactoferricinBandseveralSequenceMutationsinYeastS．cerevisiaeMastercandidate：FengYongqianSupervisor：ZhaiChaoyangObjectiveToconstructtheeucaryotierecombinantplasmidofpYES2／LactoferricinBandexpressinyeastofS．cerevisiaeandpreliminaryvedfytheantiba
5、cterialactivity．MethodsThegeneofLactoferricinBanditsseveralsequencemutationswereamplifiedfromthepartsofthepre-synthesizedsinglechainsbyself-templatePCRmethod．TheywereclonedintothevectorofpYES2toconstructthereeombinedexpressionplasmidpYES2／LactoferricinBetc．Extractedthepurposeplasmidandtransformedth
6、emintotheyeastofS．cerevisiae．Theexpressionsofproteinsweredeterminedafterinductionbygalactose．Theproteinswerecollectedandpurifiedbyhydronium-exchangecolumn，andbacteriainhibitingtestidentifiedtheantibacterialactivities．ResultsThePCRamplifyingandDNAsequencingtestsindicatedthepurposeplasmidcontainedthe
7、geneofLactoferricinBandseveralmutations．TheinductedproteinswereconfmnedbySDS．PAGEelectrophoresisandmassspectrumtest．。Thevitoantibacterialactivitiesofthemutationswereverifiedpreliminary．ConclusionTherecombin
