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《lactoferricin+b基因和幾種變異克隆的構建及其在釀酒酵母中的表達和鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、四川I大學碩士學位論文聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本學位論文成果是本人在四川大學讀書期間在導師指導下取得的，論文成果歸四Jtl；k學所有，特此聲明。申請人：指導教師：馮永礴御灑網川大學碩上學位論文中文摘要LactoferricinB基因與幾種變異克隆的構建及其在釀酒酵母S．cerevisiae中的表達與鑒定研究生
2、馮永潛導師翟朝陽教授目的構建牛乳鐵多肽(LactoferricinB)的真核表達質粒pYES2／LactoferricinB，實現其在釀酒酵母S．cerev婦iae中的表達，初步檢測其不同變異的體外抗菌活性。方法通過分別合成LactoferricinB基因兩條單鏈的部分序列，讓其互為模板、引物進行PCR擴增，得到LactoferrieinB與幾種變異的基因序列。將它們克隆到穿梭質粒pYES2中，構建重組質粒pYES2／LactoferricinB等，轉化到大腸桿菌ToplO中，讓其大量增殖。提取目的質粒經純化后將轉化到S．cerevisiae中，通過營養(yǎng)缺陷型篩選獲得重組酵母菌并通過半乳糖誘
3、導使其表達目的蛋白。經離子交換柱純化收集目的蛋白后，通過體外抑菌實驗比較其抗菌活性。結果提取含該片段的重組質粒經PCR擴增檢驗、DNA測序表明，所得幾種質粒分別包含了LaetoferrieinB與幾種變異的基因序列，即成功構建了目的載體。提取誘導后的蛋白進行SDS．PAGE電泳及質譜檢測，證實目的蛋白的存在。抑菌實驗初步檢測目的蛋白具有一定的體外抑菌活性。結論構建了重組質粒pYES2／LactoferricinB等，能夠在S．cereviMae中誘導表達，獲得分子量約為3．4KD的LactoferdcinB重組蛋白，為進一步研究其生物功能及抗菌活性提供了幫助。關鍵詞抗菌肽Laetoferri
4、cinB基因序列變異酵母表達朗川大學碗t學位論文AbstractCloningandVerificationofLactoferricinBandseveralSequenceMutationsinYeastS．cerevisiaeMastercandidate：FengYongqianSupervisor：ZhaiChaoyangObjectiveToconstructtheeucaryotierecombinantplasmidofpYES2／LactoferricinBandexpressinyeastofS．cerevisiaeandpreliminaryvedfytheantiba
5、cterialactivity．MethodsThegeneofLactoferricinBanditsseveralsequencemutationswereamplifiedfromthepartsofthepre-synthesizedsinglechainsbyself-templatePCRmethod．TheywereclonedintothevectorofpYES2toconstructthereeombinedexpressionplasmidpYES2／LactoferricinBetc．Extractedthepurposeplasmidandtransformedth
6、emintotheyeastofS．cerevisiae．Theexpressionsofproteinsweredeterminedafterinductionbygalactose．Theproteinswerecollectedandpurifiedbyhydronium-exchangecolumn，andbacteriainhibitingtestidentifiedtheantibacterialactivities．ResultsThePCRamplifyingandDNAsequencingtestsindicatedthepurposeplasmidcontainedthe
7、geneofLactoferricinBandseveralmutations．TheinductedproteinswereconfmnedbySDS．PAGEelectrophoresisandmassspectrumtest．。Thevitoantibacterialactivitiesofthemutationswereverifiedpreliminary．ConclusionTherecombin
