mir-26a在子宮平滑肌瘤發(fā)病中的作用及其啟動子調控區(qū)cpg二核苷酸甲基化狀態(tài)研究

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1、第二軍醫(yī)大學碩士學位論文miR-26a在子宮平滑肌瘤發(fā)病中的作用及其啟動子調控區(qū)CpG二核苷酸甲基化狀態(tài)研究TheroleofmiR-26ainuterineleiomyomaandCpGmethylationstatusofitspromoterregulationregion研究生姓名：林流芳導師姓名：劉玉環(huán)副教授專業(yè)名稱：婦產(chǎn)科學培養(yǎng)單位：第二軍醫(yī)大學附屬長海醫(yī)院二。一三年五月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同

2、志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。學位論文作者簽名：糊簽字日期：沙侈年歲知日學位論文使用授權書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權第二軍醫(yī)大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)導師簽名：刁嵋如脅I簽字日期：毒矽，舞蛔多713目錄摘要?????????????????一1一Abstr

3、act????????????????一3一縮略詞表???????????????一6一前言?????．．???????????一7一刖吾?????．．???????????一，一第一部分子宮平滑肌瘤細胞的原代培養(yǎng)及鑒定?????一8一一、實驗材料??????????????．一8一二、實驗方法??????????????．一9一三、實驗結果??????????????一11一四、討論???????????????．一12一五、參考文獻??????????????一14一第二部分miR-26a在子宮平滑肌瘤細胞中的作用????．一16一一、實驗材料

4、???．．??????????．一16一二、實驗方法??????????????一17一三、實驗結果??????????????一19一四、討論????．．??????????．．一24一五、參考文獻?．??????．．．?????．．一25一第三部分miR-26a基因啟動子Cp6的甲基化狀態(tài)與子宮肌瘤發(fā)病機制的關系??????????????．??一27一一、實驗材料??????????????一27—二、實驗方法??????????????一28一三、結果???????????????．一32一四、討論???????????????．一35一五

5、、參考文獻??????????????一36一結論????????????????．．一38一綜述????????????????一39一在讀期間發(fā)表的論文????????????．一47一附錄一主要試劑的配制???????????一48一附錄二CpG甲基化頻率原始數(shù)據(jù)????????．．一49一致謝????????????????．．一55—miR-26a在子宮平滑肌瘤發(fā)病中的作用及其啟動子調控區(qū)CpG二核苷酸甲基化狀態(tài)研究捅姜研究背景與目的：子宮肌瘤是女性生殖器最常見的良性腫瘤，多見于30．50歲的婦女，發(fā)病率占20．30％，有報道40．50歲

6、婦女子宮肌瘤發(fā)病率高達51．2％．60％。其主要癥狀包括異常子宮出血、盆腔受壓引起下腹部不適、肌瘤變性或扭轉引起疼痛等，嚴重時甚至可致流產(chǎn)或不孕等，嚴重威脅廣大女性的身心健康。子宮肌瘤雖為良性腫瘤，但也有少數(shù)可發(fā)生惡變(O．13％～1．39％)，加之其居高不下的發(fā)病率，年輕化的發(fā)病趨勢，對整個醫(yī)療體系及社會的長遠發(fā)展造成了很大的影響。目前對于其發(fā)病機制尚不明確，若能對發(fā)病機理有新的認識可為其治療提供新的思路。目前普遍認為子宮肌瘤是雌、孕激素依賴性的良性腫瘤，藥物治療主要通過拮抗雌、孕激素及其受體的表達。在課題組前期實驗中，我們發(fā)現(xiàn)在子宮肌瘤中miR

7、．26a顯著低表達的(P<0．05)，對ERo、PRa起調控作用，所以我們猜測是否miR．26a在子宮肌瘤中對ERa、PRa的調節(jié)失控，促使ERo、PRa的表達增加，從而增加子宮平滑肌瘤細胞對雌、孕激素的敏感性增加而促進肌瘤的生長?再者miR．26a在子宮肌瘤中低表達是否是因為其上游的啟動子調控區(qū)CpG位點發(fā)生甲基化而引起的?基于前期實驗結果、miR．26a研究現(xiàn)狀及立題思路，我們試圖通過研究miR．26a的表達對雌、孕激素生物學效應的影響，探討miR．26a在子宮平滑肌瘤發(fā)病中的作用，以及通過對miR．26a上游啟動子調控區(qū)CpG位點的甲基化分析

8、進一步深入探討子宮平滑肌瘤的發(fā)病機制，以期能為子宮平滑肌瘤的的靶向治療提供新的思路。研究方法：我們通過I型膠原酶消化、篩網(wǎng)