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《鐵皮石斛葉片原生質(zhì)體培養(yǎng)及離體根尖體細胞胚發(fā)生研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、浙江大學碩士學位論文鐵皮石斛葉片原生質(zhì)體培養(yǎng)及離體根尖體細胞胚發(fā)生研究姓名：詹忠根申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導(dǎo)教師：張銘20030601摘要本研究論文之一是對鐵皮石斛無菌試管苗的幼嫩葉片原生質(zhì)體的游離及培養(yǎng)條件研究。結(jié)果表明原生質(zhì)體分離的適宜酶液配比是O．5％Pectinase和1．O％cellulaseOnozukaR—lO；酶解時間為6h；滲透壓調(diào)節(jié)劑的濃度為O．5M，以蔗糖作為滲透壓調(diào)節(jié)劑優(yōu)于甘露醇和葡萄糖，但是此時原生質(zhì)體的產(chǎn)量下降28．7—38．1％；在酶液中添加150mg．L’1的抗壞血酸及20mg．L1的Cacl：可分別使原生質(zhì)體的存活率提高9．2％
2、和15．7％；在酶解之前對材料進行質(zhì)壁分離處理使原生質(zhì)體的產(chǎn)量提高了3．23％，存活率提高了4．2％。葉肉原生質(zhì)體培養(yǎng)，在3—5d開始第一次分裂，并能持續(xù)分裂至形成胚性細胞團。較為適宜的培養(yǎng)條件是附加O．5mg．一N從及1．Omg．Lfl6一BA的MS。培養(yǎng)基；稍低的溫度(21±O．5℃)；1501x的持續(xù)光照；培養(yǎng)密度為5×105個．m一：采用液體淺層和雙層培養(yǎng)在出現(xiàn)分裂時間、分裂頻率等方面均優(yōu)于瓊脂糖包埋法和瓊脂島培養(yǎng)法，但液體淺層培養(yǎng)中細胞持續(xù)分裂較弱；暗處理24h的葉片原生質(zhì)體在培養(yǎng)中其內(nèi)含物的外溢及質(zhì)膜破裂情況均明顯減少，且分裂能力提高2．2％；培養(yǎng)基中添加5
3、0mg．L1的抗壞血酸、5mg．L1的cacl：、100mg．L1的精氨酸均使原生質(zhì)體的分裂能力有所提高：但低溫處理(5℃)24h的葉片，其原生質(zhì)體的產(chǎn)量與存活率沒有提高，反而有所下降，分裂能力也無明顯變化。本研究論文之二是以鐵皮石斛的離體根尖為外植體，研究了在不同的培養(yǎng)條件下離體根尖經(jīng)愈傷組織形成體細胞胚、直接產(chǎn)生體細胞胚及直接形成芽后再生植株。在改良Bs(微量元素為原來的l／3)中加入1．Omg．r2，4一D和3．Omg．L_16一BA對離體根尖的愈傷組織誘導(dǎo)較為合適，0．5mg．L_lN從有利于從愈傷組織上產(chǎn)生體細胞胚；6一BA明顯促進離體根尖直接產(chǎn)生類原球莖，而
4、N從則有阻礙作用；同時N從的存在也使離體根尖直接成芽的時間延長。對其再生植株的過程進行細胞學觀察后認為鐵皮石斛的類原球莖是單細胞起源的真正的體細胞胚。關(guān)鍵詞：石斛；原生質(zhì)體培養(yǎng)；細胞分裂；愈傷組織；類原球莖；體細胞胚發(fā)生ABS’lIltAC’l’E丘色ctsofisolated如dcultIm羽onprotoplastsderived丘omyoungleaVesofDe砌6f“mQ歷cfn講BXl聊“mef肘轡D踮pectictIlbeplantletwerediscussedin也ep印eLInollrstudy'theappm砸ateconditioninisoIa
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7、e．neapprop血teconditioninthecult眥eisMSlsupplemem—ed塒th0．5mg．L_1NAAa王訂1．Omg．L．16～BA．Forpro：oplastsurviVali11theiIlitiaIculturerelativelyJowtemperanJre(2l士0．5℃)aildlowlightimensiq(1501x)areprcferable．CulturedeIlsi諺is5×10’cell．mL．‘，The1lqIlidtlliIlculnlreanda囂ose-1iquiddou_bl
