分離以尿素為氮源的微生物

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1、實驗2分離以尿素為氮源的微生物細菌尿素NH3中性堿性酚紅顏色：黃色紅色(變色范圍pH6.4-8.2)任務1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進行篩選。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g尿素10ml選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內含一定量的含氮化合物（1）將土壤中的固氮菌分離出來（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物……2、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對土壤中的細菌確實具有選擇作

2、用，你該如何設計實驗。思考：配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g酵母粉：0.12gNaCl：0.25g瓊脂糖：0.5g對照組選擇培養(yǎng)基實驗組3、請你提供一種方法，判斷分解尿素的細菌確實能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細菌，若指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。二、實驗目的:使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細菌(有脲酶)通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的

3、化學反應)統(tǒng)計被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量三、實驗中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實驗用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質？（三）可用什么指標認定不同土壤中選擇出的微生物對尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質豐富的土壤碳源、尿素、無機鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計數(shù)法三、實驗中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計數(shù)時，菌落數(shù)在30-300計數(shù)。重復性原則對照原則（排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響

4、，提高實驗的可信度）做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度（六）實驗設計要遵循的原則：過濾滅菌后的尿素（二）制備細菌懸液制備成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀釋液配制菌懸液1個99ml無菌水2個4.5ml無菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤倒平板需要倒3個LB平板，9個尿素平板LB(對照)尿素10-310-410-5每個稀釋度1個LB對照平板3個尿素平板(平行重復組)接種取0.1ml菌懸液涂布分離高濃度→低濃度，換槍頭低濃度→高濃度，可不用換槍頭涂布分離37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-4、10

5、-3,、10-2利用血球計數(shù)板的缺點:不能區(qū)分死菌與活菌不適于對運動的細菌計數(shù)需要相對高的細菌濃度個體小的細菌在顯微鏡底下難以觀察5.在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的結果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設置對照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A練習題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，將允許種類的微生物生長，同時和其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。阻止特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)

6、目。當樣品的足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)。此外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有直接計數(shù)。顯微鏡稀釋度細菌30-3003、在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。平均數(shù)4、用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)，在對應稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中．得到以下幾種統(tǒng)計結果，正確的是A．涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個平板，統(tǒng)計

7、的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是2l0、240和250，取平均值233D5.在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的結果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設置對照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A