[經(jīng)典]生化試劑對(duì)膽汁酸測(cè)定的交叉污染及防范措施

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1、[經(jīng)典]生化試劑對(duì)膽汁酸測(cè)定的交叉污染及防范措施生化試劑對(duì)膽汁酸測(cè)定的交叉污染及防范措施【摘要】目的探討生化試劑對(duì)膽汁酸(TBA)測(cè)定的交叉污染及防范措施。方法①采用放大的方法，將總膽汁酸作為觀察項(xiàng)目，其他常規(guī)生化項(xiàng)目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC作為干擾項(xiàng)目，篩查并確認(rèn)對(duì)總膽汁酸測(cè)定有明顯干擾的項(xiàng)目;②設(shè)定特殊清洗程序來降低干擾。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)尿酸、三酰甘油、總膽固醇對(duì)總膽汁酸測(cè)定有明顯的正干擾。設(shè)置加強(qiáng)水

2、沖洗試劑針程序可有效的去除尿酸的干擾；設(shè)置在總膽汁酸項(xiàng)目加試劑前對(duì)儀器固定比色杯自動(dòng)清洗后再進(jìn)行特殊清洗，可消除因試劑攜帶污染對(duì)總汁酸測(cè)定的干擾。結(jié)論全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定總膽汁酸存在項(xiàng)B間的交叉污染，設(shè)置特殊清洗方式可有效地消除因試劑攜帶污染對(duì)TBA測(cè)定的干擾。【關(guān)鍵詞】生化試劑；膽汁酸；總膽固醇；交叉污染全自動(dòng)生化分析儀具有微量、快速、多項(xiàng)、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等特點(diǎn)。隨著全自動(dòng)生化分析儀的廣泛應(yīng)用，其測(cè)定過程中存在的交叉污染問題也受到關(guān)注。在檢測(cè)標(biāo)本中的總膽酸的含量時(shí)，通過調(diào)整項(xiàng)目通道后仍發(fā)現(xiàn)膽汁酸單項(xiàng)特別高，在復(fù)查時(shí)結(jié)

3、果又正常的現(xiàn)象。膽汁酸在肝服疾病、新生兒黃疸、孕婦肝內(nèi)膽?汁淤積癥、冠心病等方面都是及其重要的檢測(cè)指標(biāo)^[l]o所以，筆者就膽汁酸結(jié)果的不穩(wěn)定性及防范措施進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室觀察，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料1.1儀器與試劑日立7170型全自動(dòng)生化分析儀。ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TG、CHOL、GLU、FRUC市上海合富公司提供。APOA、APOB±海北加公司提供，TBIL、DBIL由上海利德曼公司提供，TBA由煙臺(tái)奧斯邦公司提供。1.2混合血清采用Randox公司的質(zhì)控血清。1.3清洗液

4、日立公司的堿性清洗液HIALKAU-Do2方法2.1膽汁酸檢測(cè)原理如圖lo2.2可疑項(xiàng)目的篩查將常規(guī)生化項(xiàng)目ALT、CREA、GGT、AST、TP、UA、ALB、TBIL、DBIL、TG、CHOL、HDL、BUN、APOA、APOB、GLU、FRUC及蒸惚水作為待測(cè)樣木來測(cè)定總膽汁酸，篩查出對(duì)TBA有明顯干擾的項(xiàng)目。1.3可疑項(xiàng)目的確認(rèn)將混合血清連續(xù)測(cè)定10次TBA,計(jì)算其均值和標(biāo)準(zhǔn)差。取均值作為相應(yīng)項(xiàng)冃的靶值取均值，然后再按如下順序測(cè)定；如先測(cè)GGT再測(cè)TP,即反映GGT試劑對(duì)TP測(cè)定的影響，如此反復(fù)10次。計(jì)算其均

5、值和標(biāo)準(zhǔn)差，與和應(yīng)的靶值比較。其他組合也同樣按照上述方法進(jìn)行，然后做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.4交叉污染的排除2.4.1設(shè)定蒸餡水加強(qiáng)沖洗程序在日立生化儀上設(shè)置清除試劑間交叉干擾的程序，在試劑針從施干擾項(xiàng)轉(zhuǎn)向TBA項(xiàng)目吋再對(duì)試劑針用蒸館水加強(qiáng)沖洗1次。重復(fù)2?3操作，觀察交叉污染是否依然存在。2.4.2設(shè)定比色杯清洗程序?qū)⒂眉訌?qiáng)蒸憾水清洗后交叉污染依然存在的組合列出，在測(cè)定完某個(gè)對(duì)另一個(gè)項(xiàng)目將造成污染的項(xiàng)目后，在特殊清洗程序中設(shè)定試劑針1、試劑針2分別向該使用過的杯子注入清洗劑的程序。重復(fù)2.3操作，觀察交叉污染是否依然存在。2

6、.4.3統(tǒng)計(jì)分析使用SPSSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，測(cè)定值與靶值組進(jìn)行配對(duì)樣木t檢驗(yàn)，P〈0?05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果2.1篩查實(shí)驗(yàn)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，UA、TG、TC對(duì)TBA疑有止干擾，總膽紅素和肌酹可能對(duì)總膽汁酸有干擾，見表1。1.2可疑項(xiàng)冃的確認(rèn)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，UA、TG、TC對(duì)TBA有明顯的正干擾，而總膽紅素和肌酹的可能干擾則可被試劑針的常規(guī)清洗程序排除（見表2）。1.3設(shè)定蒸幗水加強(qiáng)沖洗程序Z后，尿酸對(duì)總膽汁酸的交叉污染基木排除，測(cè)定值與靶值比較，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0?05）o但總膽固醇和三酰甘油對(duì)總膽汁酸的

7、污染依然存在（見表3）o1.4設(shè)定固定比色杯清洗程序后。各組合的交叉污染基本排除。測(cè)定值組與靶值組比較，結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0?05）（見表4）。3討論膽汁酸是由肝臟分解代謝的，能反映肝實(shí)質(zhì)損傷。所以膽汁酸的結(jié)果影響到疾病的診斷治療和預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)室采用循環(huán)酶法測(cè)定膽汁酸的含量，通過不斷的循環(huán)使微量的膽汁酸信號(hào)被擴(kuò)增（圖1）,擴(kuò)增的量決定于循環(huán)次數(shù)，這種方法不但可以提高檢測(cè)的靈敏度，而且也大大減少了共存物質(zhì)的干擾。多通道生化分析儀的試劑加樣機(jī)構(gòu)需接觸各種試劑成分，因此當(dāng)試劑針、攪拌針和固定比色杯清洗不完全或清洗液的

8、效率低時(shí)，殘留試劑或反應(yīng)產(chǎn)物污染試劑針、攪拌針和固定比色杯，從而會(huì)可能導(dǎo)致相鄰檢測(cè)項(xiàng)冃結(jié)果的不穩(wěn)定性。膽汁酸結(jié)果的不穩(wěn)定性，薈萃資料表明，有3個(gè)主要原因:第一，試劑成分屮含有某種被污染的項(xiàng)目；第二，試劑中含有下一個(gè)測(cè)試所要測(cè)定底物或含有的某種試劑成分，與下一反應(yīng)所測(cè)定的底物有作用，因而直接影響下一反應(yīng)測(cè)定的結(jié)果;第三，該試劑所引導(dǎo)