人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7.doc

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1、MCF-7人乳腺癌細(xì)胞?MCF-7細(xì)胞描述：???????MCF-7細(xì)胞保留了多個(gè)分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物（domes）。?該細(xì)胞含有Tx-4癌基因。?腫瘤壞死因子α（TNF?alpha）可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)。?抗雌激素處理細(xì)胞能調(diào)變IGFBP’S的分泌。????MCF-7細(xì)胞增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請(qǐng)按照正確的培養(yǎng)方法來(lái)解凍、傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力，方便您的后繼研究順利進(jìn)行。貨號(hào)規(guī)格培養(yǎng)基運(yùn)輸保存C00401×106個(gè)/管DMEM+10%?FB

2、S干冰運(yùn)輸液氮保存質(zhì)量控制：???本細(xì)胞經(jīng)過了檢測(cè)，不含有細(xì)菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。??培養(yǎng)條件：37℃，5%?CO2，PH值7.2~7.4，無(wú)菌恒溫培養(yǎng)。細(xì)胞相關(guān)操作（注意：細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作）收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法：1.?先從外包裝盒拿出細(xì)胞瓶，在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；2.?在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，并確定是否染菌，如有染菌，請(qǐng)立即拍照，并將細(xì)胞丟掉；3.?將培養(yǎng)瓶置于37°C，5%?CO2的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí)；4.?倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基；5.?重新將培養(yǎng)瓶置于3

3、7°C，5%?CO2的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜；6.?第二天傳代。?收到凍存細(xì)胞的處理方法：1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；迅速攪動(dòng)2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；5.置于37°C，5%?CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞傳代1.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，給細(xì)胞傳代；2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；3.在

4、超凈臺(tái)中，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS清洗細(xì)胞后，再加入1ml胰酶消化細(xì)胞；4.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，加入5ml培養(yǎng)基終止消化；5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；6.將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm離心5min；7.棄上清，加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×104?cells/cm2?(2.5×105?cells/T-25瓶），混勻細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布；8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5%?CO

5、2的無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞凍存1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；2.消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù):1)洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)；2)充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；3)顯微鏡下，數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)，無(wú)活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色；4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2；這里10000是不變的，因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3

6、計(jì)數(shù)池內(nèi)，1cm3=1ml，將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù)，乘2是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。注:細(xì)胞密度高時(shí)，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例，計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。3.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞。4.在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min。5.棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×106/ml。6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°

7、C放1-2h后，-80°C過夜，然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。