人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7.doc

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1、MCF-7人乳腺癌細(xì)胞?MCF-7細(xì)胞描述:???????MCF-7細(xì)胞保留了多個(gè)分化了的乳腺上皮的特性,包括:能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物(domes)。?該細(xì)胞含有Tx-4癌基因。?腫瘤壞死因子α(TNF?alpha)可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長。?抗雌激素處理細(xì)胞能調(diào)變IGFBP’S的分泌。????MCF-7細(xì)胞增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代,以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力,方便您的后繼研究順利進(jìn)行。貨號規(guī)格培養(yǎng)基運(yùn)輸保存C00401×106個(gè)/管DMEM+10%?FB

2、S干冰運(yùn)輸液氮保存質(zhì)量控制:???本細(xì)胞經(jīng)過了檢測,不含有細(xì)菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。??培養(yǎng)條件:37℃,5%?CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養(yǎng)。細(xì)胞相關(guān)操作(注意:細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無菌操作)收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法:1.?先從外包裝盒拿出細(xì)胞瓶,在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;2.?在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),并確定是否染菌,如有染菌,請立即拍照,并將細(xì)胞丟掉;3.?將培養(yǎng)瓶置于37°C,5%?CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí);4.?倒掉多余的培養(yǎng)基,留正常體積的培養(yǎng)基;5.?重新將培養(yǎng)瓶置于3

3、7°C,5%?CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜;6.?第二天傳代。?收到凍存細(xì)胞的處理方法:1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;迅速攪動2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;5.置于37°C,5%?CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞傳代1.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí),給細(xì)胞傳代;2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;3.在

4、超凈臺中,棄培養(yǎng)基,加入2-5mlPBS清洗細(xì)胞后,再加入1ml胰酶消化細(xì)胞;4.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓,有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí),加入5ml培養(yǎng)基終止消化;5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞,并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散;6.將細(xì)胞移入離心管中,1000rpm離心5min;7.棄上清,加入15-20ml的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25瓶中(確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間),細(xì)胞密度在1×104?cells/cm2?(2.5×105?cells/T-25瓶),混勻細(xì)胞懸液,確保細(xì)胞均勻分布;8.將培養(yǎng)瓶置于37°C,5%?CO

5、2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞凍存1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;2.消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù):1)洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片,將蓋玻片完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū);2)充分混勻細(xì)胞,取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺盼藍(lán)混合,移液器吹吸混合均勻,用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞,以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;3)顯微鏡下,數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù),無活性細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞不被染色;4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2;這里10000是不變的,因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3

6、計(jì)數(shù)池內(nèi),1cm3=1ml,將四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù),乘2是補(bǔ)償加等體積臺盼藍(lán)形成的稀釋。5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。注:細(xì)胞密度高時(shí),可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺盼藍(lán)的比例,計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。3.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí),可以凍存細(xì)胞。4.在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管,1000rpm離心5min。5.棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞,并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×106/ml。6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,-20°

7、C放1-2h后,-80°C過夜,然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。

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