抗人球蛋白試驗.ppt

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1、抗人球蛋白試驗馬強虎1945年，英國免疫學家?guī)炷匪梗–oombs）等人發(fā)明了能檢測紅細胞表面抗體的一種新試驗，即抗人球蛋白試驗。別名：Coombs‘試驗(庫姆斯試驗)。Coombs試驗是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集?？谷饲蚍ㄊ菣z測不完全抗體的經典方法，分為直接試驗(直接反應)和間接試驗(間接反應)。直接Coombs試驗：是檢查被檢紅細胞上有無不完全抗體。間接Coombs試驗：是檢查血清中游離的不完全抗體。直接抗人球蛋白試驗直接抗人球蛋白試驗原理：患者體內

2、若有與紅細胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細胞結合形成抗原抗體復合物。但因不完全抗體分子量小，不能有效地連接抗原抗體復合物，僅使紅細胞處于致敏狀態(tài)。加入抗球蛋白血清，與紅細胞上吸咐的不完全抗體結合，在致敏紅細胞之間搭橋，出現(xiàn)肉眼可見的凝集。這種直接檢測體內被抗體或（和）補體致敏紅細胞的試驗稱之為直接抗球蛋白試驗。直接抗人球蛋白試驗直接抗人球蛋白試驗操作：（65%凝膠，35%抗人球蛋白試劑）1.撕開檢測卡的封膜于反應腔中加入待檢1%RBC生理鹽水懸液50ul；2.將檢測卡于離心機1800r/min1m

3、in,2500r/min1min離心；3.取出，結果判讀；結果判讀直接Coombs試驗抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見凝集4.結果解釋陽性：待檢標本RBC已致敏IgG不完全抗體或補體；陰性：待檢標本RBC未致敏不完全IgG抗體。間接抗人球蛋白試驗間接抗人球蛋白試驗原理：用已知抗原的紅細胞檢測受檢者血清中相應的不完全抗體；或用已知的不完全抗體檢測紅細胞上相應的抗原。在37℃條件下，若被檢血清或紅細胞有對應的不完全抗體或抗原，則抗原抗體作用使紅細胞致敏再加抗人球蛋白試劑，與紅細胞上不完全抗體結合，出現(xiàn)肉眼可

4、見凝集。這種通過體外將紅細胞致敏后，再檢測紅細胞有無不完全抗體或抗原的試驗稱為間接抗人球蛋白試驗。間接抗人球蛋白試驗間接抗人球蛋白試驗操作：（65%凝膠，35%抗人球蛋白試劑）1.撕開檢測卡的封膜于反應腔中依標記分別加入相應的0.5%篩選細胞LIM懸液100ul，各管再加入待檢血漿或血清25ul；2.將檢測卡37℃孵育≧10min，取出，置離心機1800r/min1min,2500r/min1min離心；3.取出，結果判讀；（方法同上）間接Coombs試驗抗人免疫球蛋白同種異型抗體4.結果解釋陽性：待檢

5、血漿或血清中含有不完全抗體IgG或完全抗體IgM；陰性：待檢血漿或血清中不含不完全抗體IgG或完全抗體IgM；抗人球蛋白試驗意義1.本試驗是診斷自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的重要依據(jù)，特別是IgG型引起的溶血性貧血，直接反應常呈強陽性，間接反應大多陰性，但亦可陽性。（血腎科有一病例）2.新生兒同種免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及間接反應均強陽性，持續(xù)數(shù)周、換血輸血后數(shù)天內可變?yōu)殛幮裕捎凇癆BO”血型不合引起的溶血病，直接常為陰性或弱陽性，間接反應為陽性.3.藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血①

6、α-甲基多巴型：直接及間接反應均陽性。②青霉素型：直接反應陽性，間接反應陰性③福阿亭型：（奎寧等藥物）抗體通常為IgM，偶有IgG型者，直接反應為陽性，間接反應陰性4.冷凝集素綜合征：直接反應陽性，間接反應陰性（37℃）。由于本病紅細胞膜附著的是補體C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做試驗時則結果陰性，如以抗補體的抗血清做試驗則直接反應陽性。5.紅細胞血型不合引起的輸血反應6.ABO或Rh血型不合輸血，供者的紅細胞被受者的血型抗體致敏，在供者被致敏的紅細胞完全破壞以前，直接反

7、應陽性7.Rh陰性者如過去不曾接受過Rh陽性者的血或曾沒有妊娠Rh陽性胎兒者，間接反應陽性，第一次輸血后（Rh陽性的血），數(shù)天之內間接反應也會變?yōu)殛栃?.在傳染性單核細胞增多癥、SLE、惡性淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、癌腫、鉛中毒、結節(jié)性動脈周圍炎、EVan氏綜合征等，病人直接反應亦可陽性9.陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥患者中，急性發(fā)作后用抗補體血清做試驗直接反應常為陽性。我們科室Coombs試驗已開展，報告方法：1、接收標本；2、完成試驗；3、免疫組中免疫手工中報告結果。謝謝