資源描述：
《實驗一、硫酸苯酚法測多糖含量電子教案.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、實驗一、硫酸苯酚法測多糖含量精品文檔實驗一硫酸－苯酚法測多糖含量1．目的要求
???測量蒽酮硫酸法不能測量的血清型的過程樣品中的多糖含量
2．方法原理
糖在濃硫酸作用下，水解生成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚縮合成橙黃色化合物，且顏色穩(wěn)定，在波長490nm處和一定的濃度范圍內(nèi)，其吸光度與多糖含量呈線性關(guān)系正比，從而可以利用分光度計測定其吸光度，并利用標準曲線定量測定樣品的多糖含量，本方法可用于多糖、單糖含量的測定。
3．主要實驗儀器及材料
????濃硫酸，苯酚，蒸餾裝置，分光光度計，電子天平，坐標紙或電腦等。
４．掌握要點
??硫酸顯色的安全、準確操作，單
2、糖到多糖的轉(zhuǎn)換系數(shù)。
５．試劑配制
1）葡萄糖標準液的配制
準確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，蒸餾水準確定容至100mL的1mg/L的葡萄糖液，搖勻后準確吸取10mL該溶液，蒸餾水稀釋定容至100mL,即得100ug/mL的葡萄糖標準液。
2）90%苯酚液的配制
??準確移取苯酚90mL，蒸餾水定容至100mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制將90%苯酚液稀釋至6%，即一體積儲存液對應十四體積純水，臨用現(xiàn)配。6.實驗步驟表1?標準曲線的制作步驟
管號??????0?????????1??????2??????3???????4???????5
3、??????6?????7
葡萄糖?0.0?????0.1???0.2???0.3????0.4???0.6??0.8?1.0
苯酚液?0.5????0.5???0.5???0.5????0.5???0.5???0.5??0.5
濃硫酸?3.0????3.0???3.0???3.0????3.0???3.0???3.0??3.0
取8支干凈的具塞試管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震蕩搖勻后緩慢逐滴加入純硫酸，以不放熱或微量放熱為宜，搖勻后恒溫加塞沸水放置20min,取出涼水冷卻10min,以0號作為空白調(diào)零,在最大吸收波長處（490nm）測定
4、吸光度。以葡萄糖濃度X為橫坐標（ug/mL），吸光度Y為縱坐標，從而來繪制標準曲線。用exceL軟件求得回歸方程
2收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔）待測樣品多糖的測定與計算
將提取得到的待測多糖用蒸餾水溶解，定容至100mL,取溶解后的溶液，按標準曲線中的測定方法，以樣液為參比液，測定溶液的吸光值，按回歸方程計算待測溶液的多糖濃度，注意乘換算系數(shù)。二、實驗原理游離的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在濃硫酸的作用下脫水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物與蒽酮縮合成藍色的化合物，在620nm處有最大吸收，在一定糖濃度范圍內(nèi)（200ug/ml），溶液吸光度值與糖
5、溶液的濃度成線性關(guān)系。用酸將植物組織中沒有還原性的多糖和寡糖徹底水解成具有還原性的單糖，或直接提取植物組織中的還原糖，即可對植物組織中的總糖和還原糖進行定量測定。三、實驗材料1．可見分光光度計、電子天平(1/100)、粉碎機、水浴鍋、電爐。研缽、量筒、三角燒瓶、燒杯、容量瓶、玻璃漏斗、試管1.5cm×15cm、刻度吸管、膠頭滴管、pH試紙、坐標紙。四、實驗試劑1．蒽酮試劑：取2g蒽酮溶于l000ml體積分數(shù)為80％的硫酸中，當日配制使用。2．標準葡萄糖溶液(0.1mg-m1)：稱取100mg葡萄糖，溶于蒸餾水并稀釋至1000ml（可滴加幾滴甲苯作防腐劑）。3．6mol
6、-LHCl溶液：50ml鹽酸，加水至100ml。4．10％NaOH溶液：稱取10gNaOH固體，溶于蒸餾水并稀釋至100ml。五、操作步驟1．葡萄糖標準曲線的繪制取干凈試管6支，按下表進行操作。以吸光度為縱坐標各標準液濃度(mg-m1)為橫坐標做圖。2．樣品中還原糖的提取和測定稱取植物原料干粉0.1～0.5g，加水約3ml，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用約30ml的蒸餾水沖洗研缽2～3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。于50℃水浴中保溫半小時（使還原糖浸出），取出，冷卻后定容至100ml。過濾，取lml濾液進行還原糖的測定：吸取lml總糖類溶液置試管中，浸于冰浴中冷
7、卻，再加入4ml蒽酮試劑，沸水浴中準確加熱10min，取出用自來水冷卻后比色，其他條件與做標準曲線相同，測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量。（樣品液顯色后若顏色很深，其吸光度超過標準曲線濃度范圍，則應將樣品提取液適當稀釋后再加蒽酮顯色測定）。標準曲線的制作及樣品測定參考表1#2#3#4#5#6#7#（樣品）8#（樣品）收集于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請聯(lián)系管理員刪除精品文檔標準葡萄糖溶液(ml)00.20.40.60.81.0還原糖總糖蒸餾水(ml)1.00.80.60.40.20樣品液(ml)------1.01.0糖溶液濃度(mg/ml)00.02
