總糖的測定：苯酚硫酸法.doc

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1、總糖的測定：苯酚硫酸法2008-12-0622:38:00作者：來源：互聯(lián)網(wǎng)瀏覽次數(shù)：758文字大?。骸敬蟆俊局小俊拘　勘椒?硫酸法測定總糖[原理]多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。[試劑]1．濃硫酸：分析純，95.5%2．80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲(chǔ)存。3．6%苯酚：臨用前以80%苯酚配制。（每次測定均需現(xiàn)配）4．標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。5．15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲(chǔ)存。

2、6．5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲(chǔ)存。7．6mol/L氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶于500ml水。8．6mol/L鹽酸[操作]1．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補(bǔ)至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2．樣品含量測定：①取樣品1克（濕樣）加1

3、ml15%TCA溶液研磨，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升離心管中，再加少許5％TCA溶液研磨，倒上清液，重復(fù)3次。最后一次將殘?jiān)黄鸬饺腚x心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。②離心，轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘，共三次。第一次15分鐘，取上清液。后兩次各5分鐘取上清液到25毫升錐形比色管中。最后濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時(shí)，每次取上清液時(shí)應(yīng)過濾。因?yàn)槠渲竞看笕菀讑A帶殘?jiān)＃鬯?，在向比色管中加?毫升6mol/L鹽酸之后搖勻，在96℃水浴鍋中水浴2小時(shí)。④定容取樣。水浴后，用流水冷卻后加入2毫升6mol/L氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容

4、量瓶中。吸取0.2ml的樣品液，以蒸餾補(bǔ)至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度。每次測定取雙樣對(duì)照。以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。[注意]測定時(shí)根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.1——0.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時(shí)取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。