tnfα對tp酶的調(diào)節(jié)及其對5fu前體藥作用

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1、TNFα對TP酶的調(diào)節(jié)及其對5FU前體藥作用【摘要】目的:探討TNFα對胸苷磷酸化酶(TP酶)的調(diào)節(jié)及其與5FU前體藥化療敏感性的關(guān)系.方法:應(yīng)用TNFα誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中的TP酶,ELISA法檢測腫瘤組織中TP酶蛋白水平,采用MTT法檢測藥物敏感性變化.結(jié)果:大腸癌細(xì)胞株Lovo和SCF7中的TP酶含量為(30.1±1.4)μg/g,高于MCF/ADR的TP酶(18.8±0.4)μg/g.TNFα上調(diào)MCF7和MCF/ADR中TP酶表達(dá)呈時間和劑量依賴性.耐藥株MCF/ADR中TP酶上調(diào)高達(dá)(28.4±1.2)μg

2、/g,未達(dá)非耐藥細(xì)胞株水平.MCF7細(xì)胞中TP酶上調(diào)1.27倍,對氟鐵龍的IC50降低了1.33倍,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論:TNFα能劑量時間依賴性上調(diào)腫瘤細(xì)胞的TP酶,TNFα為5FU前體藥化療增效.【關(guān)鍵詞】胸苷磷酸化酶;氟尿嘧啶;氟尿苷;卡培他濱;腫瘤壞死因子α  【Abstract】AIM:ToexploretheregulativeactionofTNFαonthymidinephosphorylase(TP)anditseffectonthesensitivityofprodrugto5fluoroura

3、cil(5FU)incancercelllines.METHODS:TheTPleveloftumorcellsearsuredbyELISA.AndthentheMTTassayallconcentrationofTNFα.RESULTS:TheTPinLovoorSCF7displayeda1.27foldincrease,edependentincreaseinthelevelofTPandenhancethesensitivityofMCF7to5FU.  【Keyidinephosphorylase;flu

4、orouracil;floxuridine;capecitabine;tumornecrosisfactoralpha  0引言  胸苷磷酸化酶(thymidinephosphorylase,TP酶)是近年來發(fā)現(xiàn)的嘧啶核苷代謝過程中的一個關(guān)鍵酶,是5FU前體藥物(卡培他濱、脫氧氟尿苷)轉(zhuǎn)化為氟尿嘧啶的最后一個限速酶.近來一些研究表明,胸苷磷酸化酶與腫瘤的化療關(guān)系密切,它能增強(qiáng)患者對5氟尿嘧啶(5FU)前體藥物化療的敏感性,提高化療效果,改善腫瘤患者的預(yù)后[1].TNFα,INFγ等多種因子能夠上調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)TP酶的表

5、達(dá).我們應(yīng)用TNFα誘導(dǎo)結(jié)腸癌和乳腺癌細(xì)胞中TP上調(diào)并觀察其對5FU前體藥物的細(xì)胞毒作用,為指導(dǎo)臨床用藥提供理論依據(jù).  1材料和方法  1.1材料  人結(jié)腸癌細(xì)胞株Lovo和SCF7和MCF7/ADR由天津腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室保存.RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清購自Gibco公司,MTT和DMSO為Sigma公司產(chǎn)品.氟鐵龍為上海羅氏制藥有限公司生產(chǎn);5FU(250mg/支)為天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn);重組改構(gòu)人TNFα(5MU/支)為上海賽達(dá)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn).TP酶檢測試劑盒為羅氏診斷公司提供.BCA蛋白濃

6、度測定試劑盒為碧云天生物技術(shù)研究所提供.  1.2方法  1.2.1TNFα對腫瘤細(xì)胞中TP酶的調(diào)節(jié)將長滿培養(yǎng)瓶對數(shù)生長期細(xì)胞用無菌PBS洗滌后加入2.5g/L胰蛋白酶消化細(xì)胞,800r/min離心8min,加入培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為4×109/L.每瓶加入細(xì)胞懸液1mL,再加入培養(yǎng)液4mL.37℃,50mL/LCO2,飽和濕度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液,加入含20,200,1000kU/LTNFα的新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)48h,消化、收集、凍存細(xì)胞.另培養(yǎng)24h后棄去原培養(yǎng)液,加入含TNFα的新鮮培養(yǎng)液,使培養(yǎng)液中T

7、NFα的濃度為200kU/L,繼續(xù)培養(yǎng)24,48,72,96h,消化、收集、凍存細(xì)胞.取出-80℃冰箱中凍存的細(xì)胞,反復(fù)凍溶5次,使細(xì)胞充分裂解.Eppendorff離心5min(13000r/min),后收集上清150μL.按照說明書利用BCA法檢測上清液蛋白濃度,ELISA檢測腫瘤細(xì)胞中胸苷磷酸化酶水平.應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)測得的A值計(jì)算出TP酶濃度.腫瘤細(xì)胞中的TP酶含量(μg/g)=樣品TP酶濃度(μg/L)/上清液蛋白質(zhì)的濃度(g/L).  1.2.2MTT法檢測藥物敏感試驗(yàn)將對數(shù)生長期細(xì)胞

8、接種于96孔培養(yǎng)板,每孔加入細(xì)胞懸液200μL(1×104個),置37℃,50mL/LCO2孵箱中培養(yǎng)24h.棄去原培養(yǎng)液,分別加入含有藥物(5FU,5dFUrd)的不同濃度(100,10,1,0.1,0.01mg/L)的新鮮培養(yǎng)液200μL(每孔設(shè)3個復(fù)孔

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