脂肪源性干細(xì)胞體外成骨特性的研究

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1、脂肪源性干細(xì)胞體外成骨特性的研究作者：李俊剛，王萬明，孫效棠【摘要】　　目的探討兔脂肪源性干細(xì)胞體外成骨分化能力。方法取3個(gè)月齡新西蘭白兔頸背部皮下脂肪組織，Ⅰ型膠原酶消化獲得細(xì)胞。繪制細(xì)胞生長曲線，采用免疫細(xì)胞熒光法檢測細(xì)胞表面抗原CD44、CD45；分別加入條件培養(yǎng)液對所獲得細(xì)胞進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo)，并分別進(jìn)行形態(tài)學(xué)、堿性磷酸酶、鈣鹽沉積和油紅O染色相關(guān)檢測；將脂肪源性干細(xì)胞分為成骨誘導(dǎo)組和非成骨誘導(dǎo)組，分別于誘導(dǎo)后1、2、3、4周檢測兩組的堿性磷酸酶和鈣離子濃度并作統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果a)所獲細(xì)胞CD44陽性表達(dá)，CD45陰性表達(dá)；所繪制的生

2、長曲線成典型的“S”型。b)在誘導(dǎo)條件下，堿性磷酸酶及鈣鹽沉積均呈陽性表達(dá)，油紅O染色為陽性。c)堿性磷酸酶濃度在誘導(dǎo)組與非誘導(dǎo)組之間存在組間差別，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組堿性磷酸酶濃度均高于非誘導(dǎo)組(P＜0.05，n＝5)；誘導(dǎo)組堿性磷酸酶濃度在不同誘導(dǎo)時(shí)相其濃度變化趨勢不同(P＜0.05，n＝5)；鈣離子濃度在誘導(dǎo)組與非誘導(dǎo)組之間存在組間差別，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組鈣離子濃度高于非誘導(dǎo)組(P＜0.05，n＝5)。誘導(dǎo)組鈣離子濃度在不同誘導(dǎo)時(shí)相其濃度變化的趨勢不同(P＜0.05，n＝5)。結(jié)論脂肪干細(xì)胞的易分離培養(yǎng)、增殖快和良好的成骨誘導(dǎo)活性完全

3、符合對種子細(xì)胞的要求，是一種理想的骨組織工程種子細(xì)胞。【關(guān)鍵詞】脂肪源性干細(xì)胞；成骨分化；堿性磷酸酶；鈣離子　　Abstract：ObjectiveToexplorethedifferentiationofadiposederivedstemcells(ADSCs)fromrabbitsintoosteogeniccellsinvitro.MethodsInthisstudy，ADSCsthenapeofNemunofluorescenceandcellauxodromeedosteogenicandadipogenicdifferen

4、tiationrespectively，folloorphology，alkalinephosphataseassay，VonKossaandrathonumredOstain.ADSCsconcentrationofthesetthecheckesredOstainofADSCsediums.c)Alkalinephosphataseassays(ALP)e(P＜0.05，n＝5)andALPoftheinducedgroupconcentrationconcentrationofinducedgroupse(P＜0.05，n＝5)

5、andcalciumconcentrationoftheinducedgroupakesADSCsidealseedcellsofbonetissueengineering.　　Keycells；osteogenicdifferentiation；alkalinephosphataseassay；calciumion　　脂肪源性干細(xì)胞(adiposederivedstemcells，ADSCs)是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，同時(shí)它具有來源豐富、基金項(xiàng)目：南京軍區(qū)

6、醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究“十一五”計(jì)劃資助項(xiàng)目(06MA137)取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞、低免疫源性、不涉及道德倫理問題等優(yōu)點(diǎn)，此外，已證實(shí)其具有向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等方向分化的能力［1，2］。因此，ADSCs是一種很有前景的組織工程種子細(xì)胞，具有非常重要的研究價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)通過研究兔脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定以及體外成骨、成脂誘導(dǎo)分化過程，為其能夠作為骨組織工程理想的種子細(xì)胞提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！　?資料與方法　　1.1材料　　3個(gè)月齡新西蘭白兔(福州總院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，低糖、高糖Dulb

7、eco改良的MEM培養(yǎng)液(dulbeco′smodifildeaglemedium，DMEM)(Gibco公司)，Ⅰ型膠原酶、胰蛋白酶、地塞米松、L抗壞血酸、β甘油磷酸鈉、胰島素、3異丁基1甲基黃嘌呤(3isobutyl1methylxanthine，IBMX)、吲哚美辛、二甲基亞砜(DMSO)、噻唑藍(lán)(Sigma公司)、標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(杭州四季青)，CD44、CD45抗體、正常山羊血清(武漢博士德)，F(xiàn)ITC標(biāo)記羊抗小鼠IgG(北京中杉金橋)，堿性磷酸酶染色試劑盒、堿性磷酸酶檢測試劑盒、鈣離子檢測試劑盒(南京建成生物制品有

8、限公司)，培養(yǎng)瓶、6孔、12孔及96孔板(Costar公司)。　　1.2方法　　1.2.1ADSCs的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)　　取3個(gè)月齡新西蘭白兔，雌雄不限，速眠新0.2～0.3mL/kg肌注麻