pparγ在肝外膽管癌中的表達及其意義

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1、PPARγ在肝外膽管癌中的表達及其意義作者：劉兵王文斌王安峰呂海濤劉明【摘要】目的觀察PPARγmRNA和蛋白在肝外膽管癌組織中的表達，并探討其與肝外膽管癌臨床病理特征之間的關(guān)系。方法采用RTPCR和Western印跡檢測PPARγmRNA和蛋白在30例肝外膽管癌組織中的表達情況。結(jié)果RTPCR法檢測結(jié)果顯示肝外膽管癌組織中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組PPARγmRNA表達分別為0.47±0.06和0.24±0.07，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);低分化組和高中分化組PPARγmRNA表達分別為0.3±0.19和0.17±0.01，差異無統(tǒng)計學(xué)意義

2、(P>0.05);Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期肝外膽管癌組織PPARγmRNA表達分別為0.63±0.35和0.63±0.28，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Western印跡結(jié)果顯示肝外膽管癌組織中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組PPARγ蛋白表達水平分別為2.0±0.44和0.93±0.21，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);低分化組和高中分化組中，PPARγ蛋白表達分別為0.87±0.23和0.96±0.15，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期，PPARγ蛋白表達分別為2.45±0.54和1.95±0.24，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P

3、>0.05)。結(jié)論PPARγ可能對肝外膽管癌的發(fā)生和發(fā)展起促進作用。8【關(guān)鍵詞】PPARγ;肝外膽管癌;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng);免疫印跡過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細胞分化和能量平衡、炎癥反應(yīng)、動脈粥樣硬化及腫瘤細胞的分化與凋亡等生理和病理過程，其中PPARγ與腫瘤的關(guān)系已日益引起人們關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ位于機體多種信號傳導(dǎo)的交叉點，相關(guān)文獻已經(jīng)證明PPARγ配體(pioglitazone，PGZ)對肝門膽管癌細胞系QBC939細胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，從而成為新的腫瘤治療

4、靶點〔1〕。然而，PPARγ在膽管癌組織中的表達尚無報道。本文利用RTPCR及Western印跡技術(shù)檢測PPARγmRNA和蛋白在肝外膽管癌中的表達情況，并探討其表達與肝外膽管癌臨床病理特征的關(guān)系?！　?材料與方法　　1.1材料手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的肝外膽管癌組織30例(腺癌26例，其中高中分化15例，低分化11例;黏液腺癌4例)，男18例，女12例，年齡37～74(平均57.2)歲。術(shù)前均未作放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療。Ⅰ期11例，Ⅱ、Ⅲ期19例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。所有患者均取新鮮癌組織標本，取材后迅速投入液氮中冷凍保存。引物由上海生物

5、工程有限公司合成。8　　1.2RTPCR檢測PPARγmRNA表達采用異硫氰酸胍一步法提取肝外膽管癌總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR反應(yīng)：PPARγ引物序列為正義：5′GCAGTGGGGATGTCTCATAATGC3′，反義:5′CAGGGGGGTGATGTGTTTGAAC3′，產(chǎn)物長度為328bp。GAPDH引物序列為：正義：5′GGAAGGTGAAGGTCGGAGT3′，反義：5′CCTGGAAGATGGTGATGGG3′，產(chǎn)物長度為231bp。反應(yīng)條件：94℃變性5min，94℃50s，54℃30s，72℃30s，35次循環(huán)后72℃延伸

6、10min。PCR產(chǎn)物于1.5%瓊脂糖凝膠中電泳，90V，40min，紫外分析儀中觀察并照相，凝膠分析軟件定量。采用凝膠分析軟件(BIO1D)分析各條帶平均灰度值，以PPARγ與內(nèi)參照基因GAPDH的灰度比值表示PPARγmRNA相對表達量。　　1.3Western印跡檢測PPARγ蛋白的表達冰PBS洗滌后的組織加入蛋白裂解液，勻漿收集上清。蛋白定量后，經(jīng)10%SDSPAGE后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉封閉4h，加入1∶400一抗〔小鼠抗人PPARγ(E8)單克隆抗體，SantaCruz公司〕4℃過夜，二抗室溫孵育1h后，ECL發(fā)光。以PPARγ與βa

7、ctin條帶的比值表示PPARγ蛋白的表達量?！　?.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析;采用單因素方差分析(ANOVA)，數(shù)據(jù)采用x±s表示。8　　2結(jié)果　　2.1PPARγmRNA表達與肝外膽管癌臨床病理特征的關(guān)系RTPCR檢測結(jié)果顯示：肝外膽管癌組織中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組PPARγmRNA表達水平分別為0.47±0.06和0.24±0.07，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(圖1)。低分化組和高中分化組中PPARγmRNA表達分別為0.3±0.19和0.17±0.01，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(圖2)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期癌

8、組織PPA