pparγ在肝外膽管癌中的表達(dá)及其意義

pparγ在肝外膽管癌中的表達(dá)及其意義

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1、PPARγ在肝外膽管癌中的表達(dá)及其意義作者:劉兵王文斌王安峰呂海濤劉明【摘要】目的觀察PPARγmRNA和蛋白在肝外膽管癌組織中的表達(dá),并探討其與肝外膽管癌臨床病理特征之間的關(guān)系。方法采用RTPCR和RNA和蛋白在30例肝外膽管癌組織中的表達(dá)情況。結(jié)果RTPCR法檢測結(jié)果顯示肝外膽管癌組織中,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組PPARγmRNA表達(dá)分別為0.47±0.06和0.24±0.07,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);低分化組和高中分化組PPARγmRNA表達(dá)分別為0.3±0.19和0.17±0.01,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期肝外膽管癌組織PP

2、ARγmRNA表達(dá)分別為0.63±0.35和0.63±0.28,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。RNA和蛋白在肝外膽管癌中的表達(dá)情況,并探討其表達(dá)與肝外膽管癌臨床病理特征的關(guān)系。  1材料與方法  1.1材料手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的肝外膽管癌組織30例(腺癌26例,其中高中分化15例,低分化11例;黏液腺癌4例),男18例,女12例,年齡37~74(平均57.2)歲。術(shù)前均未作放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療。Ⅰ期11例,Ⅱ、Ⅲ期19例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。所有患者均取新鮮癌組織標(biāo)本,取材后迅速投入液氮中冷凍保存。引物由上海生物工程有限公司合成?! ?.2RTP

3、CR檢測PPARγmRNA表達(dá)采用異硫氰酸胍一步法提取肝外膽管癌總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR反應(yīng):PPARγ引物序列為正義:5′GCAGTGGGGATGTCTCATAATGC3′,反義:5′CAGGGGGGTGATGTGTTTGAAC3′,產(chǎn)物長度為328bp。GAPDH引物序列為:正義:5′GGAAGGTGAAGGTCGGAGT3′,反義:5′CCTGGAAGATGGTGATGGG3′,產(chǎn)物長度為231bp。反應(yīng)條件:94℃變性5min,94℃50s,54℃30s,72℃30s,35次循環(huán)后72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物于1.5%瓊脂糖凝膠中電泳,90V,4

4、0min,紫外分析儀中觀察并照相,凝膠分析軟件定量。采用凝膠分析軟件(BIO1D)分析各條帶平均灰度值,以PPARγ與內(nèi)參照基因GAPDH的灰度比值表示PPARγmRNA相對表達(dá)量?! ?.3RNA表達(dá)與肝外膽管癌臨床病理特征的關(guān)系RTPCR檢測結(jié)果顯示:肝外膽管癌組織中,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組PPARγmRNA表達(dá)水平分別為0.47±0.06和0.24±0.07,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(圖1)。低分化組和高中分化組中PPARγmRNA表達(dá)分別為0.3±0.19和0.17±0.01,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖2)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期癌組織PPARγmRNA

5、表達(dá)分別為0.63±0.35和0.63±0.28,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖3)?! ?.2PPARγ蛋白表達(dá)與肝外膽管癌臨床病理特征的關(guān)系Western印跡結(jié)果顯示肝外膽管癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組中PPARγ蛋白表達(dá)水平分別為2.0±0.44和0.93±0.21,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(圖4)。低分化組和高中分化組中PPARγ蛋白表達(dá)分別為0.87±0.23和0.96±0.15,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(圖5)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期癌組織PPARγ蛋白表達(dá)分別為2.45±0.54和1.95±0.24,兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

6、)(圖6)?! ?討論  肝外膽管癌屬于少見的惡性腫瘤,據(jù)統(tǒng)計(jì)在所有惡性腫瘤中所占比例不足2%,但其發(fā)病率有逐漸增多趨勢。雖然手術(shù)切除為其主要的治療手段,但是國內(nèi)近10年的手術(shù)切除率僅18%,一般為10%~20%,大多數(shù)經(jīng)手術(shù)切除治療的患者仍死于腫瘤的局部復(fù)發(fā)〔2〕。在膽管癌的治療中,放療及化療的作用還不肯定。隨著分子生物學(xué)和分子病理學(xué)的發(fā)展,已認(rèn)識到細(xì)胞癌變是基因的異常激活或失活所致,腫瘤的基因治療成為研究熱點(diǎn)?! PARγ作為核激素受體超家族中的成員之一,可通過抑制增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及分化、抑制腫瘤血管形成和降低腫瘤侵襲能力等不同機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。由于人類癌癥的多樣性和復(fù)雜性,

7、在不同的腫瘤中,PPARγ經(jīng)其配體激活后通過多種途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,研究證實(shí)在肝細(xì)胞癌、胃癌、結(jié)腸癌以及胰腺癌等腫瘤中,誘導(dǎo)細(xì)胞停滯在G0/G1期〔3~6〕。而在膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系SG231、CCLP1和HuCCT1的研究中,國外學(xué)者Han等〔7〕發(fā)現(xiàn)15dPGJ2(PPARγ的配體)和TGZ在3個(gè)細(xì)胞系中誘導(dǎo)生長抑制、G2/M阻滯;研究顯示吡格列酮作為PPARγ的高親和力配體可能通過激活PPARγ導(dǎo)致細(xì)胞周期進(jìn)程出現(xiàn)G2/M期阻

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