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1、HPLC法測(cè)定腰痛片中芍藥苷含量【摘要】目的建立腰痛片中芍藥苷的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法，ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm）為色譜柱，甲醇-0.05%磷酸（體積比40∶65）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果芍藥苷線(xiàn)性范圍為0.1448～2.8960μg，平均回收率為100.4％，RSD為1.53％（n＝6）。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好，能有效控制腰痛片的質(zhì)量。【關(guān)鍵詞】腰痛片；芍藥苷；高效液相色譜法 腰痛片收
2、載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)》中藥分冊(cè)第5冊(cè)，由杜仲葉、續(xù)斷、赤芍等12味中藥組成，具有強(qiáng)腰補(bǔ)腎、活血止痛的功效，臨床效果較好［1］。部頒標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有收載該制劑的含量測(cè)定指標(biāo)。已有文獻(xiàn)采用HPLC法測(cè)定該制劑中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量［2，3］。赤芍具有清熱涼血，散瘀止痛的功效，能反映腰痛片活血止痛的功效，因此本文選擇芍藥苷作為腰痛片含量測(cè)定的指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定制劑中芍藥苷的含量［4］，為制訂該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1儀器與試藥 Agilent1100型高效液相色譜儀（美國(guó)，Agilent）；Bra
3、nsonSB3200超聲波清洗儀（上海，Branson）；色譜柱為ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm)?！ ⊙雌ü鹆秩鹚帢I(yè)股份有限公司，基片重0.35g）；芍藥苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110736-200423）；甲醇、磷酸均為色譜純（天津四友）；水為去離子純化水；其他試劑均為分析純。 2方法與結(jié)果 2.1色譜條件 色譜柱：ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm）；以甲醇-0.05%磷酸（體積比40
4、∶65）為流動(dòng)相；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；進(jìn)樣量10μL；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。 2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥36h的芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。 2.3供試品溶液的制備3 取本品10片，去糖衣，研細(xì)，取約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率400W，頻率50kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾
5、過(guò)，取續(xù)濾液，即得?！ ?.4陰性對(duì)照品溶液的制備 取處方組成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”項(xiàng)處理，制成陰性對(duì)照品溶液?！ ?.5專(zhuān)屬性檢查 吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL注入色譜儀，測(cè)定。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品在供試品相應(yīng)的位置沒(méi)有干擾?！ ?.6線(xiàn)性及范圍 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品3.62mg，置5mL量瓶中，加甲醇制成0.724mg/mL的貯備液。精密吸取上述貯備液配成一系列對(duì)照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896mg/mL），分別精密
6、吸取10μL注入液相色譜中，測(cè)定。以芍藥苷質(zhì)量（m）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，回歸方程為：A＝11937m＋22.9，r＝0.9999。結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.1448～2.8960范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好?！ ?.7精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液（0.0724mg/mL）10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，芍藥苷峰面積RSD為1.82%?！ D1對(duì)照品（A）、樣品（B）、陰性（C）HPLC圖譜（a為芍藥苷峰）（略） Fig.1HPLCchromatogramsofcontrol(A),sample(B)andn
7、egativecontrol(C) 2.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別于0，1，2，3，5，12，24，48h精密吸取同一批號(hào)（批號(hào)為20070201）供試品溶液10μL，按“2.1”項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果芍藥苷峰面積RSD為1.25%，表明供試品在48h內(nèi)穩(wěn)定?！ ?.9重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)腰痛片（批號(hào)為20070201）6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，并按“2.1”項(xiàng)色譜條件測(cè)定芍藥苷的含量。結(jié)果芍藥苷平均含量為3.57mg/g，RSD為1.93%。 2.10加樣回收率試驗(yàn)3 取本品（批號(hào)為20070201，含
8、量為3.57mg/g）約0.3g，精密稱(chēng)定，加入芍藥苷溶液（1.0190mg/mL）1mL，按“2.3”項(xiàng)方法制備，分別測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1?！ ?.11樣品含量測(cè)定 取3批腰痛片分別按“2.3”項(xiàng)方法制成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定芍藥苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。 表1芍藥苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n＝6）（略） Tab.1Resultsofsamplerecoverytest(n=6) 表2腰痛片中芍藥苷的含量測(cè)
