hplc法測定清瘟解毒片中芍藥苷的含量

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1、HPLC法測定清瘟解毒片中芍藥苷的含量【摘要】目的測定清瘟解毒片中芍藥苷的含量。方法采用反相高效液相色譜法，DiamonsilC18柱，甲醇0.05mol/LKH2PO4(體積比30∶70)為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長230nm，柱溫為室溫。結(jié)果芍藥苷質(zhì)量濃度在4.95～59.4μg/mL間具有良好的線性關系(r=0.9997)，芍藥苷平均回收率為104.1%，方法精密度(RSD)為0.90%(n=6)。結(jié)論該法可用于清瘟解毒片中芍藥苷的含量測定?！娟P鍵詞】清瘟解毒片;芍藥苷;高效液相色譜法;含量測定

2、　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofpaeoniflorininQingethodforthedeterminationofpaeoniflorininQingatographiccolumnonsilC18.Themobilephaseethanol0.05mol/LKH2PO4(30∶70).ThefloL·min-1,andthedetection.ThecolumntemperatureL(r=0.9997).TheaveragerecoveryforPaeoni

3、florinethodethodcanbeusedinassayofpaeoniflorinofthepreparation.　　Keyg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液(芍藥苷質(zhì)量濃度為99μg·mL-1)。　　2.1.2供試品溶液的制備取清瘟解毒片樣品，研細，取約0.25g，精密稱定，精密加水25mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液0.45μm濾膜過濾，作為供試品溶液?！　?.1.3陰性對照液的制備取處方組成中除赤芍外的其余成分制成不含赤芍的陰性對照

4、品，按“2.1.2”項下的制備方法處理得陰性對照液?！　?.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗　　色譜柱為DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm，迪馬公司)，甲醇KH2PO4(體積比30∶70)，流速為1.0mL·min-1，檢測波長230nm，柱溫為室溫。分別取對照品溶液(芍藥苷質(zhì)量濃度為29.7μg·mL-1)、供試品溶液和陰性對照溶液10μL注入色譜儀，理論板數(shù)以芍藥苷峰計算應不低于4500;芍藥苷的拖尾因子為0.94，保留時間約為21.8min，芍藥苷與其他組分可基線分離;陰性樣品不干擾樣品測定(圖1

5、)。　　2.3方法學考察　　2.3.1標準曲線制備分別吸取一定量的芍藥苷對照品貯備液，加甲醇稀釋成芍藥苷質(zhì)量濃度為4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4μg·mL-1的溶液。依次進樣10μL，每個濃度測定3次以上。以峰面積(A)對對照品溶液質(zhì)量濃度(ρ)進行回歸，得芍藥苷回歸方程A=11.20ρ-1.48，r=0.9997。表明芍藥苷質(zhì)量濃度在4.95～59.4μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。　　2.3.2精密度試驗取質(zhì)量濃度為29.7μg·mL-1的芍藥苷對照品溶液10μL連續(xù)測定5次

6、，其峰面積的平均值為326.6，RSD為0.89%，表明儀器精密度良好?！　?.3.3穩(wěn)定性試驗取供試品溶液(20060922)在0、2、4、6、8h分別進樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積的平均值為334.6，RSD為1.64%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.3.4重復性試驗取同一批號(20060922)樣品6份，照“2.1.2”方法提取、測定，結(jié)果芍藥苷平均含量為2.86mg·g-1，RSD為0.90%。表明分析方法精密度良好?！　?.3.5加樣回收試驗精密稱取同一批號樣品(20060922)共6份，加入相應

7、量的芍藥苷對照品，照“2.1.2”方法處理并測定，計算回收率，結(jié)果芍藥苷平均回收率為104.1%，RSD=0.40%，表明本方法準確可靠，見表1。廣東藥學院學報第25卷第4期易潤青，等.HPLC法測定清瘟解毒片中芍藥苷的含量表1回收率試驗結(jié)果　　2.4樣品測定　　取清瘟解毒片樣品3批，照“2.1.2”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液(29.7μg·mL-1)與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果　　3討論　　3.1根據(jù)芍藥苷的溶解性[3],分別以體積分數(shù)5

8、0%甲醇[4]、水[5]、體積分數(shù)50%乙醇[6]為提取溶劑進行試驗，測得芍藥苷含量從高到低依次為水、體積分數(shù)50%乙醇、體積分數(shù)50%甲醇，以水為溶劑含量最高，且達到基線分離，因此以水為提取溶劑。考察了超聲提取20、30、40min對提取率的影響，結(jié)果表明，超聲提取30min含量達最高，