肝硬化門靜脈高壓癥脾切除術后血小板數(shù)量變化分析.doc

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1、肝硬化門靜脈高壓癥脾切除術后血小板數(shù)量變化分析作者：祖洪亮張偉輝劉冰薛東波王曉春王海洋【關鍵詞】內皮・祖細胞・新生血管化，生理性最近十年，干細胞研究取得了許多突破性的進展，并已成功地在人體或動物的各個器官中分離出了干細胞，包括骨髓、外周血、腦、肝臟，生殖器官等。內皮祖細胞（Endothelialprecursorcells,EPCs）也已經(jīng)成功地從骨髓及外周血中分離出來。研究發(fā)現(xiàn)，EPCs與造血干細胞有共同的前體細胞，它參與生理或病理的新血管生成，對其表面標志、動員、定向誘導分化及其在機體血管新生

2、、心血管疾病與腫瘤治療中的作用進行了廣泛的研究。1EPCs與新血管生成　新血管生成包括兩個基本過程，即血管新生（vasculogenesis）和血管生成（angiogenesis）。血管新生成是指內皮前體細胞，即成血管細胞分化成內皮細胞形成原始血管網(wǎng)的過程。血管生成是指從已存在的血管以生芽方式長出新毛細血管的過程。胚胎時期機體通過血管新生和血管生成兩個過程形成新血管，成年后新血管的形成起先被認為僅由血管生成過程所形成，即由預先存在的內皮細胞增生和遷移所控制，但通過對外周血EPCs的觀察和研究［1，2］，人們對于生后新血管形成

3、的理解有了新的認識，即不僅存在血管生成，也包括血管新生。2成人中EPCs的概況2.1成人循環(huán)中EPCs存在的證據(jù)在胚胎，有證據(jù)顯示造血干細胞（hemopoieticstemcells,HSCs）和EPCs起源于共同的前體細胞――成血管細胞［3，4］。在胚胎發(fā)展過程中，多個血島先形成一個卵黃囊毛細血管網(wǎng)［5］，它是動靜脈血管系統(tǒng)基礎，并最終形成早期的血液循環(huán)。那些能產(chǎn)生造血細胞的HSCs位于血島中央，而EPCs即成血管細胞則位于血島的外圍。除了這種排列上的關系，HSCs和EPCs還具有共同抗原，包括CD34，血管內皮生長因子受

4、體2（VEGFR2），Tie2，CD117及干細胞抗原1（Sca1）［6］。造血干細胞存在于外周血及骨髓中，人們便開始考慮與之關系密切的EPCs可能也存在于上述組織中。最近，人們使用胚胎期EPCs和HSCs共有的抗原VEGFR2，CD34及CD133將EPCs成功地從循環(huán)單個核細胞中分離出來［1，7，8］。在體外，這些細胞分化成不同的內皮系細胞，在動物缺血模型中，異種的、同種的、自體的EPCs已證明可參與新血管生成。最近，有報告從臍帶血中分離出來的EPCs可在體內及體外分化成內皮細胞［9~12］。2.2循環(huán)中EPCs的分離及

5、誘導分化目前，盡管EPCs跟HSCs有共同的表面標記物如AC133、CD34或VEGFR2，但還是無法從原始的HSCs分離出“未成熟EPCs”6。目前認為，在循環(huán)中EPCs存在于表達AC133和VEGFR標記物的CD34陽性的亞細胞群中［8］。循環(huán)中的EPCs表達干/前體細胞標記物，如CD34或VEGFR2，但無AC133，同時開始表達內皮系的特殊標記物，如VE粘鈣蛋白或E選擇蛋白。另一方面，隨著定型和分化成造血干/前體細胞，AC133和VEGFR2的表面標記物逐漸消失，這些干/前體細胞標記物沒有在分化成的造血細胞上表達。A

6、C133是區(qū)分未成熟EPCs或原始HSCs與循環(huán)EPCs的標記物。而區(qū)分EPCs與造血干/前體細胞，可以采用VEGFR2、VE粘鈣蛋白或E選擇蛋白。另外，循環(huán)的EPCs也不能表達單核細胞或骨髓的標記物，如CD14或CD15。因此，循環(huán)EPCs可以通過CD34、VEGFR2和（或）VE粘鈣蛋白的抗原性選擇分離出來，循環(huán)未成熟EPCs則可以通過AC133分離。EPCs和HSCs共有許多表面標記物，通常認為EPCs包含從成血管細胞到完全分化的內皮細胞（EPCs）的不同階段的一群細胞，因此有許多不同的分離EPC的方法報道［1，2，8

7、~11］。此后，研究者發(fā)現(xiàn)，體外通過堿性成纖維細胞生長因子（basicfibroblastgrowthfactor,bFCF）、胰島素樣生長因子1（insulinlikegrowthfactor1,IGF1）和血管內皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）等生長因子對細胞分化進行誘導和控制，體外培養(yǎng)可分化出內皮細胞譜系，并于體內證明其具有生成血管能力，表達相應的細胞的細胞標志，用Fvl11/vWF染色，證實其具有內皮細胞的特征，說明了EPCs是CD34+細胞重要亞群，而且體外在V

8、EGF與bFGF參與下能有效地擴增［13］。目前經(jīng)常先用密度梯度離心法分離出骨髓或外周血單個核細胞，然后采用免疫磁珠等辦法分選出CD34+細胞，在含有VEGF、IGF1、bFGF的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在各種生長因子誘導下得到貼壁細胞就是EPCs。另外，因為AC133可以區(qū)分成熟內皮細胞及內皮祖細