蜂膠提取物對禽流感h9亞型shandongchicken98株的滅活作用效果研究

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1、2004學術(shù)年會蜂膠提取物對禽流感H9亞型Shandong/chicken/98株的滅活作用效果研究沈志強,王艷,李峰,劉吉山,吳信明,趙蕾,苗立中山東省畜禽用蜂膠疫苗研究開發(fā)推廣中o,山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究所濱州256600摘要:本文通過雞胚接種的方法就蜂膠乙醇浸出物對禽流感H9亞型Shandong/chicken/98株的滅活作用進行了研究。結(jié)果表明,常溫下3分鐘、30分鐘,37℃3分鐘、30分鐘,含蜂膠乙醇浸出物0.1mg/ml的95%乙醇稀釋液,含蜂膠乙醇浸出物2.5mg/ml的475%乙醇稀釋液,含蜂膠乙醇浸出物10mg/ml的生理鹽水稀釋液,接種雞胚后病毒HA測定為0

2、。這充分說明以上濃度蜂膠乙醇浸出物對禽流感H9亞型Shandong/chicken/98株具有完全的滅活作用。37。C3分鐘、30分鐘,含蜂膠乙醇浸出物01.mg/ml的47.5%乙醇稀釋液,含蜂膠乙醇浸出物6.25mg/ml的生理鹽水稀釋液對禽流感H9株有部分滅活作用。關(guān)鍵詞:蜂膠;禽流感;H9亞型;滅活作用蜂膠(Propolis)是蜜蜂從植物的樹芽、樹皮等部位采集的樹脂,再混以蜜蜂舌腺,蠟腺等腺體的分泌物,經(jīng)蜜蜂加工轉(zhuǎn)化而成的一種膠狀物質(zhì)。蜂膠內(nèi)含有多種酸類、醇類、酚類、酮類、醚類、酯類、烯烴和萜類化合物以及20多種黃酮類化合物,還有多種氨基酸、酶和多糖、脂肪酸以及vA、vB

3、、v,等多種維生素。蜂膠中有效成分之復雜,使其成為一種具有廣譜生物學活性的天然物質(zhì),可以提高機體的免疫功能,具有抗病菌、霉菌、病毒與原蟲等作用。本文通過雞胚接種的方法就蜂膠乙醇浸出物對禽流感H9株的滅活作用進行了試驗觀察。1材料與方法1.1試驗材料天然蜂膠由山東某蜜蜂養(yǎng)殖場提供,試驗毒株禽流感H9皿型Shandong/chicken/98株(ELD50為10‘77/0.1m1)由本所傳代保存,10日齡雞胚由山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究所畜禽良種試驗基地提供,95%乙醇購自山東某酒廠,生理鹽水由本所按常規(guī)配制,l%紅細胞由本所按常規(guī)配置。1.2試驗方法1.2.1蜂膠乙醇浸出物的提取按沈志

4、強方法進行。1.2.2蜂膠乙醇浸出物對禽流感H9亞型Shandong/chicken/98株的滅活作用將蜂膠乙醇浸出物分別用95%乙醇、47.5%乙醇與生理鹽水稀釋,使蜂膠含量(mg/m1)分別為25、12.5、10、6.25、5、2.5、1、0.1。將禽流感H9亞型Shandong/chickerd98株(ELD50為10“7/0.tmt)用生理鹽水做1000倍稀釋,即病毒含量為10~ELD50分別與上述含蜂膠乙醇浸出物稀釋液等量混合,根據(jù)作用溫度不同分為兩個試驗組,一組常溫下分別作用3分鐘、30分鐘,另一組37。C分別作用3分鐘、30分鐘。然后各接種10枚lO日齡健康雞胚,接

5、種量為0.2ml/枚。另分別取95%乙醇、47.5%乙醇、生理鹽水與10一ELD50的禽流感亞型Shandong/chicken/98H9株病毒液等量混勻,連同10~ELD50的禽流感H9亞型Shandong/chicken/98株病毒液作為對照組,各接種lo枚10日齡健康雞胚,接種量為0.21111/枚。將上述接種后的雞胚置孵化器中孵化。2004學術(shù)年會1.2.3HA測定將24小時內(nèi)死亡的雞胚棄去,48小時后死亡的雞胚連同孵化至96小時的活胚按試驗組別,分別收取各稀釋度全部雞胚尿囊液,B微量法測定其HA。1.2.4切胚體觀察分別取生理鹽水、12.5%蜂膠乙醇浸出物接種l0日齡健

6、康雞胚各l0枚,接種量為o2ml/枚。將接種后的雞胚置孵化器內(nèi)孵化96小時,觀察胚體變化。2結(jié)果2.1HA鋇0定B微量法測定試驗各組別雞胚尿囊液HA,具體結(jié)果見表一,同時測定對照組各組別雞胚尿囊液HA,具體結(jié)果見表二。2.2胚體觀察分別取接種生理鹽水、12.5%蜂膠乙醇浸出物雞胚胚體觀察,兩者均生長良好,無任何差異性變化。表1試驗各組別HA測定結(jié)果(xL092)蜂膠乙醇浸出物濃度(m∥m1)組別2512.510625525l0l3A0O分BO0O010常溫鐘C01011ll1l30AO0O分B0O0O010鐘CO1011ll3AO0O分BO0O046鐘CO081037℃30A0O

7、0O分B046鐘C0810表2對照各組別HA測定結(jié)果(xL092)組別95%乙醇+種毒47.5%乙醇+種毒生理鹽水+種毒種毒稀釋液常溫3分鐘111l30分鐘101137℃3分鐘61030分鐘610說明:“A”組以95%乙醇為稀釋劑,?B組以47.5%L醇為稀釋劑,?C’組以生理鹽水為稀釋劑3小結(jié)與討論3.1試驗結(jié)果表明,常溫下3分鐘、30分鐘,37℃3分鐘、30分鐘,含蜂膠乙醇浸出物olmg/ml的95%乙醇稀釋液,含蜂膠乙醇浸出物2.5m∥ml的475乙醇稀釋液,含蜂膠乙醇浸出

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