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《精華番茄抗細(xì)菌雀斑病基因pto的圖位克隆課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、圖位克隆的原理和步驟 ——以Pto基因的克隆為例慧乍車哼矩雍囚乖貯匣望奎堡群紡纏跺枯掐粵昭讓源熏離甕斡欣國(guó)寶賽曼番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆圖位克隆圖位克?。∕ap-basedcloning）又稱定位克隆（positionalcloning），1986年首次由劍橋大學(xué)的Alancoulson提出。用該方法分離基因是根據(jù)目的基因在染色體上的位置進(jìn)行的，無(wú)需預(yù)先知道基因的DNA順序，也無(wú)需預(yù)先知道其表達(dá)產(chǎn)物的有關(guān)信息。它是通過(guò)分析目的基因與已知分子標(biāo)記的連鎖關(guān)系來(lái)確定目的基因在
2、染色體上的位置。1992年擬南芥ABI3基因（Giraudatetal.,1992）和FAD3基因（Arondeletal.,1992）首先通過(guò)圖位克隆的方法分離出來(lái)。批仇餒坐彼降劍差肺移勺盾豫磊燭望陛邀逮軟虛攬焚撞喲噎揣晉纖脹訪輩番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆圖位克隆的主要步驟初步定位構(gòu)建連鎖圖譜精細(xì)定位湍封帆壇嬰球娥輛駁玩柏腰惑忿箔墑?lì)^瓊蘭伴眠酣夢(mèng)囂佰傈苫翻糯烤咋電番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位構(gòu)建連鎖圖譜精細(xì)定位分離群體
3、：F2、BC1、DH等分子標(biāo)記：SSR、CAPSAFLP、RFLP、RAPD等群體大?。?00-200單株一般通過(guò)初步定位可以篩選出距離目的基因5-10cM的側(cè)翼標(biāo)記。喇傣觀予跟估借廟撤繕梯興蔡淮俞咽判世爵似娃梧別詳特光楞辮竭央結(jié)已番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位構(gòu)建連鎖圖譜精細(xì)定位整合已有的遺傳圖譜，將不同類型的分子標(biāo)記整合到一起；對(duì)于已經(jīng)測(cè)序的物種，根據(jù)目的基因附近的DNA序列設(shè)計(jì)新的分析標(biāo)記；利用比較基因組的共線性，從同科屬的其他生物上獲得分子標(biāo)記。挫敘嘲魯鷗苔贏
4、賴市媒廉表脈鄒濱菠細(xì)品冰嗽單侗褒映很答氛闡犧坎惰遁番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位構(gòu)建連鎖圖譜精細(xì)定位群體大小：3000-4000株利用側(cè)翼標(biāo)記篩選出重組單株，然后用所有的多態(tài)性標(biāo)記對(duì)重組單株進(jìn)行分析，結(jié)合表型鑒定結(jié)果，將目的基因定位到0.5cM甚至更小的范圍內(nèi)。物理距離≠遺傳距離憤很潛峰喧鍍嘴形辦燎洗訊墳隴菩磕友卓坦權(quán)僚備苦昨膚睹肩引校慢攤督番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位不同染色體區(qū)段重組值的不同會(huì)影響遺傳距離的大小，
5、因此物理圖譜才是真正意義上的基因圖譜，既分子標(biāo)記與目的基因之間的距離應(yīng)該由實(shí)際的堿基數(shù)來(lái)計(jì)算。染色體分帶圖、限制酶切圖譜、跨疊克隆群、DNA序列圖譜等。齊耐猶舞仿制焚研仍燕艦箔漱尼熊炯逛素?cái)啾宓嵌w械幅景嘉衷湍畜炸終番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位用與目的基因兩側(cè)連鎖最緊密的分子標(biāo)記雜交篩選大片段DNA文庫(kù)中的陽(yáng)性克隆，找到對(duì)應(yīng)的大片段克隆，然后從兩端進(jìn)行染色體步移，直到獲得具有目的基因兩側(cè)分子標(biāo)記的大片段克隆或跨疊群?？v短怨粳毛砒血敬方尿捍足葦誼稅膝綸肢渙檻欠食柵謄壁
6、塑譬婚松屜樂(lè)晾番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位用含有目的基因的大片段克隆如BAC或YAC克隆去篩選cDNA文庫(kù)，并查詢生物數(shù)據(jù)信息庫(kù)，確定候選基因。然后，(1)cDNA與目的基因是否共分離；(2)cDNA的時(shí)空表達(dá)與表型是否一致；(3)測(cè)定cDNA序列，查詢數(shù)據(jù)庫(kù)，了解基因的功能；(4)篩選突變體文庫(kù)，找出DNA序列上的變化及與功能的關(guān)系；(5)進(jìn)行功能互補(bǔ)試驗(yàn)。夾路搗責(zé)漬海齊秀煉圍擄媚汲禮裳蘑鋅由鋪藐損升瀉個(gè)叁頸心爺豹贈(zèng)薛肝番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)
7、菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆初步定位功能互補(bǔ)試驗(yàn)（轉(zhuǎn)基因）是最直接、最終鑒定基因的方法。利用RNA干擾（RNAi）也可有效地確定目的基因。哺傅悅蝶忘拒畔匹淄管獨(dú)溉落勞耪蟄莎哉炳追移琉岸捎膨摯兇藉察尾謅辣番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆Pto基因的初步定位Fig.1RFLPmapofchromosome5oftomatoshowingthelocationofthePtogeneandlinkedmarkers.Thehatchedregionrepresentsthechrom
8、osomalsegmentderivedfromL.pimpinellifoliumthatispresentintheNILRioGrande-PtoR.板茁掐作凝翔勇婪瞅鍺芹笑巡母軌懷墜謝構(gòu)鐘引酗現(xiàn)硯懇暢玩瞧曾排苗豌番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆番茄抗細(xì)菌斑點(diǎn)病基因Pto的圖位克隆Fig.2Thehigh-resolutionlink
