實驗七 基因的圖位克隆技術(shù)

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1、圖位克隆：遺傳學(xué)的經(jīng)典策略孔忠新2012.05.21圖位克隆的定義：圖位克隆(Map-basedcloning)又稱定位克隆(positionalcloning)，用該方法分離基因是根據(jù)目的基因在染色體上的位置進行的，無需預(yù)先知道基因的DNA順序，無需預(yù)先知道其表達產(chǎn)物的有關(guān)信息。用該方法分離基因是根據(jù)功能基因在基因組中都有相對穩(wěn)定的基因座，再利用分子標(biāo)記技術(shù)對目的基因進行精確定位的基礎(chǔ)上，用與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記篩選DNA文庫，從而構(gòu)建目的基因區(qū)域的物理圖譜，再利用此物理圖譜通過染色體步移逐步逼近目的基因或通過

2、染色體登陸的方法，最終克隆目的基因并通過遺傳轉(zhuǎn)化實驗可以研究目的基因的功能。圖位克隆的原理：1.建立目的基因的遺傳分離群體2.找到與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記3.用遺傳圖或物理作圖將目的基因定位在染色體特定位置4.構(gòu)建含有大插入片段的基因組文庫5.以與目的基因連鎖的分子標(biāo)記為探針篩選基因組文庫6.用陽性克隆構(gòu)建目的基因區(qū)域的重疊群7.通過染色體步移或登陸，獲得含有目標(biāo)基因的大片段克隆8.通過亞克隆獲得目標(biāo)的小片段克隆9.測序獲得候選基因堿基序列10.通過遺傳轉(zhuǎn)化和功能互補驗證，最終確定目標(biāo)基因的功能。圖位克隆的一般流程

3、：標(biāo)記1基因標(biāo)記2標(biāo)記1基因標(biāo)記223456BAC重疊群BAC重疊群12345初步定位精細定位6親本1親本2XF1123456789100geneF2標(biāo)記1基因標(biāo)記2標(biāo)記1基因標(biāo)記22345612初步定位精細定位2cM1.2cM0.02cM0.01cM標(biāo)記1基因標(biāo)記22BAC重疊群BACClone基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7轉(zhuǎn)基因突變體單倍型分析序列-功能1、需要有精確的遺傳圖譜；2、遺傳圖譜上離目的基因很近的分子標(biāo)記在物理圖譜上還相距甚遠；3、高等植物基因組極其

4、復(fù)雜，存在大量重復(fù)序列，在實際操作中會遇到走不動的難題。圖位克隆過程存在的問題：Thankyou!