實(shí)驗(yàn)七-基因的圖位克隆技術(shù)課件.ppt

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1、圖位克隆：遺傳學(xué)的經(jīng)典策略孔忠新2012.05.21圖位克隆的定義：圖位克隆(Map-basedcloning)又稱(chēng)定位克隆(positionalcloning)，用該方法分離基因是根據(jù)目的基因在染色體上的位置進(jìn)行的，無(wú)需預(yù)先知道基因的DNA順序，無(wú)需預(yù)先知道其表達(dá)產(chǎn)物的有關(guān)信息。用該方法分離基因是根據(jù)功能基因在基因組中都有相對(duì)穩(wěn)定的基因座，再利用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行精確定位的基礎(chǔ)上，用與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記篩選DNA文庫(kù)，從而構(gòu)建目的基因區(qū)域的物理圖譜，再利用此物理圖譜通過(guò)染色體步移逐步逼近目的基因或通過(guò)染色體登陸的方法，最終克隆目的基因并通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)可以研

2、究目的基因的功能。圖位克隆的原理：1.建立目的基因的遺傳分離群體2.找到與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記3.用遺傳圖或物理作圖將目的基因定位在染色體特定位置4.構(gòu)建含有大插入片段的基因組文庫(kù)5.以與目的基因連鎖的分子標(biāo)記為探針篩選基因組文庫(kù)6.用陽(yáng)性克隆構(gòu)建目的基因區(qū)域的重疊群7.通過(guò)染色體步移或登陸，獲得含有目標(biāo)基因的大片段克隆8.通過(guò)亞克隆獲得目標(biāo)的小片段克隆9.測(cè)序獲得候選基因堿基序列10.通過(guò)遺傳轉(zhuǎn)化和功能互補(bǔ)驗(yàn)證，最終確定目標(biāo)基因的功能。圖位克隆的一般流程：標(biāo)記1基因標(biāo)記2標(biāo)記1基因標(biāo)記223456BAC重疊群BAC重疊群12345初步定位精細(xì)定位6親本1親本2XF11

3、23456789100geneF2標(biāo)記1基因標(biāo)記2標(biāo)記1基因標(biāo)記22345612初步定位精細(xì)定位2cM1.2cM0.02cM0.01cM標(biāo)記1基因標(biāo)記22BAC重疊群BACClone基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7基因1基因2基因3基因4基因5基因6基因7轉(zhuǎn)基因突變體單倍型分析序列-功能1、需要有精確的遺傳圖譜；2、遺傳圖譜上離目的基因很近的分子標(biāo)記在物理圖譜上還相距甚遠(yuǎn)；3、高等植物基因組極其復(fù)雜，存在大量重復(fù)序列，在實(shí)際操作中會(huì)遇到走不動(dòng)的難題。圖位克隆過(guò)程存在的問(wèn)題：Thankyou!