反相高效液相色譜法測定蒲薏顆粒中咖啡酸含量

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1、反相高效液相色譜法測定蒲薏顆粒中咖啡酸含量作者：韓瑜，王愛民，王海軍，王永林【摘要】　　目的建立測定蒲薏顆粒中咖啡酸含量的方法。方法色譜柱LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-水-磷酸（7∶100∶0.1）為流動相，檢測波長：323nm,柱溫：40℃,流速：1min·ml-1。結果咖啡酸在0.0053～0.848mg·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好(r=0.9999)；平均加樣回收率為97.75%，RSD=2.88%。結論該方法操作簡便，結果準確，適用于蒲薏顆粒中咖啡酸的含量測定?！娟P鍵

2、詞】咖啡酸蒲薏顆粒反相高效液相色譜　　蒲薏顆粒是由蒲公英、生薏苡仁、生何首烏、靈芝、三棱組成的復方制劑，具有清熱解毒、活血化瘀、補益氣血之功效。用于消化道腫瘤的放療、化療的輔助治療，臨床適宜病證見皮膚紅斑、色素沉著、脫發(fā)、惡心、嘔吐、口舌生瘡、精神疲憊、面色無華，舌紅偏紫，舌苔薄膩，脈弦細數(shù)等熱毒熾盛、血行瘀滯、氣血不足者，也可用于消化道腫瘤非放、化療時而見上述證情者。蒲公英為蒲薏顆粒中的主藥，而《中國藥典》2000年版收載的蒲公英含量測定指標成分為咖啡酸。為控制產(chǎn)品質量，我們對制劑中咖啡酸的含量測定方法進行了研究。

3、　　1儀器與試藥　　1.1儀器高效液相色譜儀系統(tǒng)（島津LC-10Avp），包含2臺LC-10ATvp泵；SPD-10Avp紫外檢測器，7725i手動進樣閥，TC-100柱溫箱（天津特納科技公司），L色譜工作站（廣西威瑪龍色譜科技公司）；超聲波清洗器（250ETTLERAE240電子天平［梅特勒-脫利多儀器（上海）有限公司］等。　　1.2試藥　　咖啡酸對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：885-200102；規(guī)格：供含量測定用）。乙腈（色譜純），甲醇、磷酸、氯仿等為分析純。蒲薏顆粒由貴陽醫(yī)學院藥物研究所提供（批號：

4、20030306，20030310，20030312）。　　2方法與結果　　2.1色譜條件色譜柱為LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-水-磷酸（7∶100∶0.1）；檢測波長323nm［1］；柱溫40℃；流速1.0mg·ml-1；進樣量10μl；咖啡酸的保留時間(tR)約為25min?！　?.2對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品10.60mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制得每毫升含0.1060mg的對照品儲備液。　　2.3供試品溶液的制備取裝量差異項下的

5、樣品，研細，取約2.0g，精密稱定，精密加水25ml，超聲處理（250in，搖勻，離心，取上清液5ml置干燥的離心試管中，加氯仿5ml，密塞，漩渦混合5min，離心，取上清液用濾膜（0.45μm）濾過，即得?！　?.4陰性溶液的制備按處方比例和生產(chǎn)方法制成缺蒲公英的樣品，按“2.3”項下供試品溶液的制備方法制成陰性溶液?！　?.5干擾性實驗分別取咖啡酸對照品溶液、制劑供試品溶液及缺蒲公英藥材的陰性對照液各10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，結果供試品色譜與對照品色譜相應的保留時間處有吸收峰，而陰性溶液無吸收峰

6、，說明陰性無干擾。見圖1。　　　2.6線性關系考察精密吸取上述咖啡酸對照品儲備液0.5，1，2，4，8ml分別置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得系列對照品工作液。分別精密吸取上述系列對照品工作液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜，以峰面積Y為縱坐標，進樣濃度X（mg·ml-1）為橫坐標，得回歸方程為Y＝44000097X-25772，r=0.9999，在0.0053～0.848mg·ml-1范圍內(nèi)，進樣濃度與峰面積呈良好的線性關系?！　?.7精密度實驗精密吸取咖啡酸對照品溶液（0.01060mg·ml-1

7、）10μl注入色譜儀，重復進樣5次，測定咖啡酸，結果咖啡酸平均峰面積為438974，RSD為1.47%?！　?.8穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液10μl，分別于0，1，2，4，8h進樣測定峰面積，結果供試品溶液中咖啡酸在4h內(nèi)穩(wěn)定不變?！　?.9重復性實驗取同一批號樣品供試品，按供試品溶液制備方法制備5份供試品溶液，分別進樣測定，結果樣品中咖啡酸的平均含量為0.0952mg·g-1，RSD為2.81%?！　?.10回收率實驗采用加樣回收法。精密稱取已測定含量的同一批樣品（平均含量0.0952mg·g-1）5份，精密加入咖

8、啡酸對照品適量，按制劑供試品溶液制備方法制備5份供試液，分別進樣10μl。結果見表1。表1制劑供試品中咖啡酸的回收率實驗（略）　　　2.11樣品的測定分別精密吸取咖啡酸對照品溶液和供試品溶液適量，經(jīng)0.45μm微膜過濾，分別進樣10μl，測定，計算蒲薏顆粒中咖啡酸的含量。結果見表2。表2蒲薏顆?？Х人岬暮繙y定結果（略）　　　3討論　　3.1供