反相高效液相色譜法測定頸通顆粒中葛根素的含量

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1、反相高效液相色譜法測定頸通顆粒中葛根素的含量【摘要】目的采用反相高效液相色譜法（RPHPLC）測定頸通顆粒中葛根素的含量。方法采用迪馬RP18(4.6mm×150mm，5μm),流動(dòng)相：甲醇-0.025mol·L-1磷酸溶液（20∶80），檢測波長λ=250nm，柱溫30℃，流速1ml/min。結(jié)果葛根素在0.005～0.05mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，(r=0.9999)。平均回收率100.23%，RSD=1.35%（n=5）。結(jié)論該方法操作簡便，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可作為該藥質(zhì)量控制的方法。【關(guān)鍵詞】葛根素；頸通顆粒；反相高效液相色譜法　　DeterminationofPuer

2、arininJingtongGranulebyRP-HPLC　　Abstract：ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofpuerarininJingtongGranules.MethodsDIKMARP-18column(4.6mm×150mm,5μm)ethanol-0.025mol/Lphosphoricacid(20∶80)asamobilephase.Thedetection.Thetemperatureofcolumnl/min.Theinjectionvolumel(r=0.9999).Theaveragerec

3、overyethodissimpleandcredible.ItcanbeusedforthequalitycontrolofJingtongGranules.　　KeypL7150，HITACHIDetectorL7420UVVIS。　　1.2對(duì)照品葛根素（110752200410）對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。　　1.3藥品頸通顆粒?！　?.4試劑甲醇為分析純，水為亞沸蒸餾水（自制）?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱：迪馬RP18(4.6mm×150mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-0.025mol·l-1磷酸溶液（20∶80），檢測波長λ=250nm，柱溫30℃，流

4、速1ml/min,進(jìn)樣量20μl。　　2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取葛根素對(duì)照品5mg，置50ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻備用。　　2.3供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研磨，精密稱定（約1g），置50ml錐形瓶中，加入甲醇10ml左右，超聲波處理10min，離心回收上層溶液，沉淀再加甲醇10ml左右，重復(fù)上面操作，連續(xù)3次后，將收集到的溶液放冷，用流動(dòng)相定溶于50ml容量瓶中，備用?！　?.4陰性溶液的制備及實(shí)驗(yàn)取除葛根素之外的其它藥材，按照制備工藝制成空白樣品，采用上文中樣品的處理方法進(jìn)行空白樣品處理，制成空白溶液；分別取供試品，對(duì)照品及空白溶液進(jìn)樣進(jìn)行峰檢測，結(jié)果

5、復(fù)方除葛根素外的其它藥味不干擾葛根素的測定。結(jié)果見圖1?！　?.5線性關(guān)系的考察精密稱定葛根素適量，用甲醇配制成0.1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液；依次取對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，5ml置于10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻；分別取上述溶液20μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，以峰面積（A）對(duì)對(duì)照品的濃度（C）進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為Y=3.85×107X－1.49×104（r=0.9999），結(jié)果表明葛根素進(jìn)樣量在0.005～0.05mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?！　?.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一葛根素對(duì)照品20μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積RSD為2.2%（n=5）。測定

6、結(jié)果表明，本試驗(yàn)精密度實(shí)驗(yàn)符合有關(guān)規(guī)定?！　?.7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一批復(fù)方藥材5份，按復(fù)方樣品供試液的制備方法平行操作，得5份提取液，各取20μl進(jìn)樣，峰面積RSD為2.9%（n=5）。測定結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)符合有關(guān)規(guī)定。　　2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別在1，2，3，4，5h測定，結(jié)果吸收峰面積變化不大，RSD為0.4%（n=5）。結(jié)果表明供試品制備后5h內(nèi)穩(wěn)定，色譜峰面積無明顯變化，在此時(shí)間內(nèi)，待測組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。　　2.9回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取陰性溶液5份，分別加入一定量的葛根素對(duì)照品，依法制備供試品溶液并測定，計(jì)算葛根素的回收率。結(jié)果見表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略

7、）測定結(jié)果：本方法回收率在98.9%～102.2%之間，RSD為1.35%，符合相關(guān)規(guī)定?！　?.10樣品測定取3個(gè)批次本品依法配置供式樣品并測定葛根素含量，結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果（略）　　3討論本實(shí)驗(yàn)根據(jù)葛根素性質(zhì)，采用甲醇為溶劑，每次加10ml甲醇,超聲波連續(xù)提取3次，每次10min，最后1次提取時(shí)，甲醇幾乎無色，該提取方法明顯好于一次加入30ml超聲30min的方法，故確立該提取方法。在供試品