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《蟾毒靈抑制血管生成作用的初步觀察.doc》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、蟾毒靈抑制血管生成作用的初步觀察作者：翟笑楓，呂祥，顧偉，宋長城，李柏【摘要】目的明確抗腫瘤中藥提取物蟾毒靈有無抗血管生成的活性,并檢測其量效關(guān)系。方法采用MTT法測定蟾毒靈對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304生長的抑制作用，計算IC50,觀察其量效、時效關(guān)系;并以雞胚絨毛尿囊膜為模型觀察蟾毒靈在體內(nèi)組織器官水平對血管生成的影響。結(jié)果蟾毒靈對ECV304細(xì)胞的生長有抑制作用，且呈濃度和吋間的依賴性。24、48、72hIC50分別為1.104、0.355、0.0905?g/mLo雞胚絨毛尿囊膜實驗表明蟾毒靈可顯著
2、抑制血管生成的作用，并呈濃度依賴性。結(jié)論蟾毒靈具有明確的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、抗血管生成的作用?！娟P(guān)鍵詞】蟾毒靈;抗血管生成;血管內(nèi)皮細(xì)胞;雞胚絨毛尿囊膜Abstract：ObjectiveToobservetheanti-angiogenesisactivityofbufalinandfindthebestreasonableconcentrationforfurtherclinicaluse?MethodTheinhibitoryeffectofbufalinonECV304cellsindiffer
3、enttimesandconcentrationswastestedbyMTTmethod,itsconcentration-effectandtime-effectrelationshipwasanalyzedandtheirIC50wascalculated?Theanti~angiogensiseffectinvivowastestedbythemethodofchorioallantoicmembrane(CAM).ResultBufalinhadinhibitiongrowtheffectonE
4、CV304cellswithdifferentlevel,andhadconcentrationandtimedependence?TheIC50of24,48,72hwere1.104,0.355,0.0905?g/mLrespectively.IntestofCAM,differentconcentrationsofbufalincouldinhibittheangiogenesisofCAM(P&It;0.01)withconcentrationdependency?ConclusionBufali
5、ncaninhibittheproliferationofvascularendothelialcellandhasanti-a.ngiogenesiseffect?Keywords:bufalin;anti—angiogenesis;vascularendothelialcell;chorioallantoicmembrane血管生成是惡性腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中必不可少的環(huán)節(jié)，而抗血管生成作為一種新的抗腫瘤治療手段日益受到重視。蟾賒是我國傳統(tǒng)的中藥材,很早就有蟾賒全蟲或蟾酥內(nèi)服及外用治療癥瘟積聚、痰
6、注、惡瘡等類似腫瘤疾病的記載。蟾毒靈(Bufalin,二梵蟾毒二烯酸內(nèi)脂)是從中藥蟾酥中提取的一種毒性配基之一，現(xiàn)代研究顯示,蟾毒靈在體外對人白血病、胃癌及肝癌細(xì)胞生長均有一定的抑制作用[1-4],我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)蟾毒靈是蟾賒屮體外抗肝癌藥理活性最強(qiáng)的單體之一[5]o但有關(guān)蟾毒靈抗血管生成作用的研究卻鮮有報道,本研究觀察其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304牛長的影響,并觀察了蟾毒靈對雞胚絨毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影響?，F(xiàn)報道如下。1實驗材料DMEM培養(yǎng)基、10%胎牛血清、1：250胰蛋白酶等為美國
7、Gibco公司產(chǎn)品,HEPES緩沖液為德國Merck公司產(chǎn)品，四甲基偶氮哩鹽(MTT)、蟾毒靈為Sigma公司產(chǎn)品。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304細(xì)胞購自中國科學(xué)院海細(xì)胞生物研究所，白皮受精雞蛋購自上海太平洋家禽有限公司。MIQAS醫(yī)學(xué)圖像定量分析軟件由上海中騰信息技術(shù)有限公司提供。2實驗方法2.1人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的培養(yǎng)細(xì)胞解凍后于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,37°C、5%C02、飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，取指數(shù)生長期細(xì)胞用于實驗。2.2對體外培養(yǎng)ECV304細(xì)胞生長活性的影響ECV304細(xì)
8、胞以5X104/孔接種，10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液,37°C、5%C02培養(yǎng)至融合狀態(tài)，換成無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后，加入不同濃度蟾毒靈(分別為3.8X10—5、3.8X10-4、3.8X10-3、3.8Xio-2、0.38.3.8?g/mL);陰性組為不加藥物處理的細(xì)胞懸液;空白組為無細(xì)胞及藥物的培養(yǎng)液。作用24、48、72h3個時間點采用MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率。抑制率(IR%)=[(對照組0D值-實驗組0D值)/對
