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1、懷地黃和懷山藥多糖同步提取工藝研究【摘要】 目的對懷地黃［Rehmanniaglutinosaf.YhuEichingensis(ChanetSchih)Hsiao，簡稱RG］多糖和懷山藥(DioscoreaoppositeThumbf.YhuEIchingensisHsiao，簡稱DT)多糖同步提取方法的工藝參數(shù)進行了研究。方法選取提取溫度、提取液pH、固液比3個因素，以多糖含量作為指標，通過L9(33)正交實驗確定最佳工藝參數(shù)。結(jié)果懷山藥與懷地黃多糖同步提取的最佳工藝參數(shù)為：浸提溫度65℃，浸提液pH5.5，固液比為1∶30
2、；浸提液濃縮比為4∶1，沉降劑乙醇添加量5倍于浸提液體積；采用Sevage法去除蛋白質(zhì)，提取得到的懷山藥與懷地黃同步多糖含量及得率可分別為73.68%和12.67%。結(jié)論用同步提取法得到的多糖含量及得率優(yōu)于分步提取?！娟P(guān)鍵詞】懷地黃多糖懷山藥多糖同步提取混合多糖 懷山藥，又名山芋、菜山藥，為薯蕷科多年生纏繞型草本植物，以根莖入藥［1］。山藥多糖是山藥中的主要活性成分。懷地黃具有止血和促進血細胞增殖的藥理活性，同時可以通過影響白血球和血小板來抗炎［2］。懷地黃在中醫(yī)藥中被認為是治療糖尿病的“四大圣藥”之一，現(xiàn)代藥理研究也證明其具有
3、降血糖的作用［3］。研究表明懷山藥多糖與懷地黃多糖同步后對四氧嘧啶導(dǎo)致糖尿病的小鼠具有較好的治療效果［4］。由于目前天然產(chǎn)物提取往往采用分步提取而忽略大多天然產(chǎn)物多糖需要進行復(fù)配才能起到有效的效果，因此對天然產(chǎn)物進行同步提取可以簡化提取步驟，提高多糖含量?！ ?材料與儀器 懷地黃（購于河南省焦作市）；懷山藥（購于河南省焦作市）；乙醇、正丁醇、三氯甲烷、葡萄糖、苯酚試劑均為分析純,濃硫酸為優(yōu)級純；SP-2000UV型紫外可見分光光度計（上海第三分析儀器廠），薄膜蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）。 2方法 2.1懷山藥與懷地黃
4、多糖同步提取及懷山藥工藝流程 2.1.1懷山藥與懷地黃多糖同步提取工藝取一定量懷地黃、懷山藥，粉碎至100目，加入30倍水，浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入20倍水、90℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷山藥與懷地黃同步多糖粗品。 2.1.2懷山藥多糖分步提取工藝［5］取一定量懷山藥，粉碎至100目，加入20倍水，纖維素酶加量7.5%，65℃浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入25倍水、90
5、℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷山藥多糖粗品?！ ?.1.3懷地黃多糖分步提取工藝［6］取一定量懷地黃，粉碎至100目，加入20倍水，纖維素酶加量7.5%，65℃浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入25倍水、90℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷地黃多糖粗品?！ ?.2同步多糖蛋白質(zhì)脫除方法［7］
6、2.2.1三氯乙酸法［8］（TCA法）收集100ml懷地黃與懷山藥浸提液，加入100ml30％的三氯乙酸溶液，靜置，離心，上清液減壓濃縮至原液體積1/4，加入5倍于濃縮液體積的95％乙醇，靜置，離心，收集沉淀物，分析懷山藥與懷地黃多糖含量及得率?！ ?.2.2Sevag法［9］收集100ml懷地黃與懷山藥浸提液，加入20ml的Sevag試劑（氯仿與正丁醇體積比為5∶1的同步液），劇烈振蕩30min，離心，回收上層清液，重復(fù)上述步驟，進行第2次蛋白的去除，離心后取上層清液減壓濃縮至原液體積1/4，加入5倍于濃縮液體積的95％乙醇，靜
7、置，離心，收集沉淀物，分析懷山藥與懷地黃多糖含量及得率?！ ?.3浸提液濃縮倍數(shù)與乙醇添加量對同步多糖提取得率的影響稱取懷地黃40g，熱水浸提后，3000r/min離心30min，收集浸提液3200ml，各取200ml采用不同的濃縮倍數(shù)和沉降劑（乙醇）添加量進行沉降，3500r/min離心，收集沉淀物，分析同步多糖得率?！ ?.4正交實驗法優(yōu)選懷山藥與懷地黃多糖（1∶1）提取工藝懷山藥、懷地黃多糖同步提取中，為了獲得最大多糖含量，并結(jié)合生產(chǎn)實際，選擇提取溫度、提取液pH值和固液比3個主要工藝參數(shù)作為考察因素，每因素選取3個水平，按
8、L9(33)正交表安排實驗，以同步多糖含量作為衡量提取效率的指標，優(yōu)選最佳工藝參數(shù)。為了提高其統(tǒng)計分析的可靠性，每一條件下進行3次重復(fù)實驗（n=3），測定結(jié)果取其平均值供統(tǒng)計分析用?！ ?.5多糖含量與得率的測定方法苯酚-硫酸法［2］?！ ?.5.
