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1、懷地黃和懷山藥多糖同步提取工藝研究【摘要】 目的對(duì)懷地黃〔Rehmanniaglutinosaf.Yhueichingensis(ChanetSchih)Hsiao，簡(jiǎn)稱RG〕多糖和懷山藥(DioscoreaoppositeThumbf.YhueichingensisHsiao，簡(jiǎn)稱DT)多糖同步提取方法的工藝參數(shù)進(jìn)行了研究。方法選取提取溫度、提取液pH、固液比3個(gè)因素，以多糖含量作為指標(biāo)，通過(guò)L9(33)正交實(shí)驗(yàn)確定最佳工藝參數(shù)。結(jié)果懷山藥與懷地黃多糖同步提取的最佳工藝參數(shù)為：浸提溫度65℃，浸提液pH5
2、.5，固液比為1∶30；浸提液濃縮比為4∶1，沉降劑乙醇添加量5倍于浸提液體積；采用Sevage法去除蛋白質(zhì)，提取得到的懷山藥與懷地黃同步多糖含量及得率可分別為73.68%和12.67%。結(jié)論用同步提取法得到的多糖含量及得率優(yōu)于分步提取。【關(guān)鍵詞】懷地黃多糖懷山藥多糖同步提取混合多糖 懷山藥，又名山芋、菜山藥，為薯蕷科多年生纏繞型草本植物，以根莖入藥〔1〕。山藥多糖是山藥中的主要活性成分。懷地黃具有止血和促進(jìn)血細(xì)胞增殖的藥理活性，同時(shí)可以通過(guò)影響白血球和血小板來(lái)抗炎〔2〕。懷地黃在中醫(yī)藥中被認(rèn)為是治療糖尿病
3、的“四大圣藥”之一，現(xiàn)代藥理研究也證明其具有降血糖的作用〔3〕。研究表明懷山藥多糖與懷地黃多糖同步后對(duì)四氧嘧啶導(dǎo)致糖尿病的小鼠具有較好的治療效果〔4〕。由于目前天然產(chǎn)物提取往往采用分步提取而忽略大多天然產(chǎn)物多糖需要進(jìn)行復(fù)配才能起到有效的效果，因此對(duì)天然產(chǎn)物進(jìn)行同步提取可以簡(jiǎn)化提取步驟，提高多糖含量。 1材料與儀器 懷地黃（購(gòu)于河南省焦作市）；懷山藥（購(gòu)于河南省焦作市）；乙醇、正丁醇、三氯甲烷、葡萄糖、苯酚試劑均為分析純,濃硫酸為優(yōu)級(jí)純；SP-2000UV型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠），薄膜蒸發(fā)
4、儀（德國(guó)Heidolph公司）?！ ?方法 2.1懷山藥與懷地黃多糖同步提取及懷山藥工藝流程 2.1.1懷山藥與懷地黃多糖同步提取工藝取一定量懷地黃、懷山藥，粉碎至100目，加入30倍水，浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入20倍水、90℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷山藥與懷地黃同步多糖粗品?！ ?.1.2懷山藥多糖分步提取工藝〔5〕取一定量懷山藥，粉碎至100目，加入20倍水，纖
5、維素酶加量7.5%，65℃浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入25倍水、90℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷山藥多糖粗品?！ ?.1.3懷地黃多糖分步提取工藝〔6〕取一定量懷地黃，粉碎至100目，加入20倍水，纖維素酶加量7.5%，65℃浸提4h，離心收集得到第1次浸提液。向藥渣中加入25倍水、90℃下、浸提2h后離心收集得到第2次浸提液，合并兩次收集的浸提液，減壓濃縮。Sevage法除
6、蛋白，重復(fù)兩次，乙醇沉淀后，離心回收沉淀，真空干燥得懷地黃多糖粗品?！ ?.2同步多糖蛋白質(zhì)脫除方法〔7〕 2.2.1三氯乙酸法〔8〕（TCA法）收集100ml懷地黃與懷山藥浸提液，加入100ml30％的三氯乙酸溶液，靜置，離心，上清液減壓濃縮至原液體積1/4，加入5倍于濃縮液體積的95％乙醇，靜置，離心，收集沉淀物，分析懷山藥與懷地黃多糖含量及得率。 2.2.2Sevag法〔9〕收集100ml懷地黃與懷山藥浸提液，加入20ml的Sevag試劑（氯仿與正丁醇體積比為5∶1的同步液），劇烈振蕩30min，離
7、心，回收上層清液，重復(fù)上述步驟，進(jìn)行第2次蛋白的去除，離心后取上層清液減壓濃縮至原液體積1/4，加入5倍于濃縮液體積的95％乙醇，靜置，離心，收集沉淀物，分析懷山藥與懷地黃多糖含量及得率。 2.3浸提液濃縮倍數(shù)與乙醇添加量對(duì)同步多糖提取得率的影響稱取懷地黃40g，熱水浸提后，3000r/min離心30min，收集浸提液3200ml，各取200ml采用不同的濃縮倍數(shù)和沉降劑（乙醇）添加量進(jìn)行沉降，3500r/min離心，收集沉淀物，分析同步多糖得率?！ ?.4正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選懷山藥與懷地黃多糖（1∶1）提取工藝
8、懷山藥、懷地黃多糖同步提取中，為了獲得最大多糖含量，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，選擇提取溫度、提取液pH值和固液比3個(gè)主要工藝參數(shù)作為考察因素，每因素選取3個(gè)水平，按L9(33)正交表安排實(shí)驗(yàn)，以同步多糖含量作為衡量提取效率的指標(biāo)，優(yōu)選最佳工藝參數(shù)。為了提高其統(tǒng)計(jì)分析的可靠性，每一條件下進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)（n=3），測(cè)定結(jié)果取其平均值供統(tǒng)計(jì)分析用?！ ?.5多糖含量與得率的測(cè)定方法苯酚-硫酸法〔2〕?！ ?.5.
