酵母雙雜交,報(bào)告基因

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1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃酵母雙雜交,報(bào)告基因  實(shí)驗(yàn)材料  菌株  酵母菌株AH109,帶有四個(gè)報(bào)告基因,ADE2,HIS3,MELI和lacZ,在三個(gè)不同的GAL4上游激活序列和TATAbox的控制下ADE2和HIS3提供了營(yíng)養(yǎng)選擇標(biāo)記,可以減少假陽(yáng)性克隆的機(jī)率:MELI編碼α-半乳糖苷酶,當(dāng)?shù)孜颴-α-Gal存在時(shí),陽(yáng)性克隆就會(huì)變成藍(lán)色;lacZ編碼β-半乳糖苷酶,當(dāng)?shù)孜餅閄-Gal存在時(shí),陽(yáng)性克隆就會(huì)變成藍(lán)色。該菌株具體特點(diǎn)見(jiàn)圖3-1,3-2?! D3

2、-1酵母菌株AH109的報(bào)告基因  圖3-2酵母菌株表現(xiàn)型  質(zhì)粒載體  陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒pGBKT7-53;  陰性對(duì)照質(zhì)粒pGBKT7-Lam;  對(duì)照的AD質(zhì)粒載體pGADT7-RecT均為clontech公司提供?! erringtestescarrierDNA購(gòu)自invitrogen公司?! ≥d體信息見(jiàn)表3-1?! ”?-1本實(shí)驗(yàn)所用酵母雙雜交載體信息  培養(yǎng)基目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常

3、、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃  ⑴YPDA培養(yǎng)基  Tryptone20g/L  Yeastextract10g1L  Adeninehemisulfute30mg/L  Agar20g/L  定容至950ml,PH=  116℃高壓滅菌15min,冷卻至55℃時(shí)加入50m1過(guò)濾滅菌的40%的葡萄糖?! 、茽I(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基  YNB/L  Agar20g/L  根據(jù)不同的營(yíng)養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基加入如下的dropoutSolution粉劑:  SD/-Leu-Trp:在不含任何氨基酸的SD培養(yǎng)基中加入二缺粉劑/L。  SD

4、/-His-Leu-Trp(三缺):在不含任何氨基酸的SD培養(yǎng)基中加入三缺粉劑/L?! D/-His-Leu-Trp-Ade:在不含任何氨基酸的SD培養(yǎng)基中加入四缺  粉劑/L  定容到950ml,高壓滅菌后加入滅菌的40%葡萄糖50ml,倒平板,于4℃保存。目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃  主要試劑  ⑴1×TE/LiAc  10×TE

5、1ml  10×LiAc1ml  ddH208ml  合計(jì)10ml ?、?×PEG/LiAc  50%PEG4000(polyethyleneglycol)8ml  10×TE1ml  10×LiAc1ml  合計(jì)10ml ?、荶buffer:  Na2HPO4·7H2O/L  NaH2PO4·/L  KCl/L  MgSO4·7H2O/L ?、萖-galstocksolution:X-gal溶于DMF中,終濃度20mg/ml。 ?、蒢buffer/X-galsolution:  Zbuffer100ml  β-ME  X-galstockso

6、lution目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車(chē)場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃  實(shí)驗(yàn)原理  實(shí)驗(yàn)原理見(jiàn)。  實(shí)驗(yàn)方法  酵母菌株AH109感受態(tài)細(xì)胞的制備 ?、艔?70℃冰箱是取出凍存的酵母菌株AH109,在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線,放入30℃的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)直至菌落直徑長(zhǎng)至2-3mm。 ?、朴媒臃N環(huán)取新鮮的AH109單菌落1個(gè),放入裝有1ml液體YPDA培養(yǎng)基離心管中,

7、渦旋打散菌落?! 、菍⒋蛏⒌木喝哭D(zhuǎn)入含50mIYPDA液體培養(yǎng)基的250m1的三角瓶中,30℃  230rpm條件下?lián)u大約18小時(shí).檢測(cè)OD600大于?! 、热舛确弦缶捍蠹s25m1加入含300m1YPDA液體培養(yǎng)基的1000ml的三角瓶中,30℃230rpm繼續(xù)搖大約3小時(shí),使OD600在左右。⑸將搖好的菌液加入50ml滅菌離心管,在室溫下,3000rpm離心10min。⑹棄上清,用10m1的無(wú)菌水重懸細(xì)胞沉淀。 ?、耸覝叵拢?000rpm離心10min。 ?、虠壣锨澹?m1的1×TE/LiAc重懸細(xì)胞,備用?! 〗湍鸽p雜交載體的

8、共轉(zhuǎn)化  pGBKT7-53和pGADT7-T共轉(zhuǎn)化入AH109作為陽(yáng)性對(duì)照。  pGBKT7-lam和pGADT7-T共轉(zhuǎn)化入AH109作為陰性對(duì)照

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