ca2+對人肝癌多藥耐藥細胞pkc的誘導作用

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1、湖北中醫(yī)藥大學碩士學位論文Ca2+對人肝癌多藥耐藥細胞PKC的誘導作用姓名：鄧薇申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：汪選斌20120517中文摘要目的：肝癌是臨床常見的惡性腫瘤之一。肝癌細胞的多藥耐藥(MDR)是肝癌化療失敗的主要原因之一?，F(xiàn)有研究已經(jīng)證實P—gp是MDR產(chǎn)生的機制之一，且MDR的產(chǎn)生總是伴隨著PKC活性或含量的改變。PKCot與P．gP蛋白的表達有關。本課題為了研究在人肝細胞肝癌(HCC)中PKCa是否需要Ca2+激活，同時闡明Ca2+對人肝癌多藥耐藥細胞PKCa的誘導作用。方法：1．實驗分組：將人肝癌細胞BEL．7402和人肝癌多藥耐藥細胞BEL一7402／ADM

2、分為8組，分別為BEL．7402、BEL．7402+TMP、BEL-7402+VRP、BEL．7402+IP3、BEL．7402幾蛐M、BEL．7402／ADM+聊、BEL-7402幾∞M+VRP、BEL．7402幾∞M+IP3，用于激光共聚焦實驗；其它實驗則分為lO組：BEL．7402、BEL．7402+TMP、BEL．7402+VRP、BEL．7402+腫+IP3、BEL．7402+Ⅵ沖+IP3、BEL．7402幾∞M、BEL．7402幾∞M+TⅣm、BEL．7402／ADM+VRP、BEL．7402／ADM+TMP+IP3和BEL．7402／ADM+VRP+IP3。2．實驗方法：2

3、．1測定人肝癌多藥耐藥細胞內(nèi)鈣離子的變化情況：采用激光共聚焦顯微鏡測定用三磷酸肌醇(IP3)、維拉帕米(Ⅵ沖)和川芎嗪(TMP)分別作用人肝癌細胞以及人肝癌多藥耐藥細胞后細胞內(nèi)Caz+的平均熒光強度。2．2測定鈣離子對人肝癌多藥耐藥細胞PKCot的影響：采用MTT測定用7個濃度梯度的ADM作用10組細胞，計算每組細胞的IC50；采用免疫熒光實驗檢測10組細胞中PKCa的熒光強度變化；用8000nmol／L的阿霉素分別作用lO組細胞，采用熒光顯微鏡檢測10組細胞內(nèi)ADM的紅色熒光強度的變化；采用流式細胞儀(FCM)檢測lO組細胞內(nèi)發(fā)出ADM紅色熒光的細胞占細胞總數(shù)的百分比；用高效液相色譜法

4、(mLC)檢測10組細胞內(nèi)ADM的濃度。結果：(1)激光共聚焦結果顯示：空白的BEL．7402細胞及BEL．7402／ADM細胞內(nèi)的Ca2+平均熒光強度分別為：574．08±3．30和665．16+_2．89，兩者比較P<0．05，有顯著差異；BEL．7402+IP3、BEL．7402+TMP及BEL．7402+VRP的胞內(nèi)鈣濃度分別為：777．78+6．35、479．17+_5．83和478．26+4．08，而BEL．7402／ADM+IP3、BEL．7402／ADM+TMP及BEL．7402／ADM+VRP則分別為：800．00+8．45、541．67+8．15和522．73+7．2

5、3，以上耐藥組與親本組比較，藥物干預組與親本組比較，P<0．05，具有顯著性差異；(2)MTT結果顯示10組細胞的IC50分別為：BEL．7402組為56．68+0．21；BEL．7402+TMP組的為28．58+0．43同空白對照組比較P<0．05；BEL．7402+VRP組的為37．954．0．29；BEL．7402+TMP+IP3組為29．52-40．37；BEL．7402+VRP+IP3組為41．35：t：0．52；BEL．7402／ADM組為74．03士0．30；BEL．7402／ADM+TMP組為48．38+0．18；BEL．7402／ADM+VRP組為51．62-40．34

6、；BEL．7402／ADM+TMP+IP3組為48．04+0．13；BEL．7402／ADM+、佩P+IP3組為56．064-0．12，以上耐藥組與親本組比較，藥物干預組與未用藥物干預組比較，P

7、度明顯增強；5組耐藥細胞組內(nèi)熒光強度趨勢同5組親本細胞組內(nèi)趨勢；用相同方法處理的耐藥組細胞同親本組細胞相比，前者的PKCa熒光強度明顯增強；(4)熒光顯微結果顯示：BEL．7402+TMP組和BEL一7402+VRP組同BEL．7402組比較細胞內(nèi)的阿霉素的熒光強度明顯增強；而BEL．7402+TMP+IP3組和BEL一7402+VRP+IP3組分別同BEL．7402+耵衄組和BEL．7402+VRP組比較，細胞內(nèi)阿霉素的熒光強度明