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《川芎嗪對(duì)人肝癌多藥耐藥細(xì)胞abc家族的抑制作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文+ADM組＞親本細(xì)胞＞Resistance+ADM組。實(shí)驗(yàn)表明，未加藥的親本細(xì)胞及耐藥細(xì)胞無(wú)阿霉素的紅色熒光，各組中親本細(xì)胞中的阿霉素?zé)晒庾顝?qiáng)，耐藥組有所減弱，經(jīng)TMP、VRP預(yù)處理后的耐藥組熒光有所增強(qiáng)，說(shuō)明TMP、VRP可使細(xì)胞內(nèi)阿霉素的蓄積量增加。三、流式細(xì)胞儀檢測(cè)川芎嗪對(duì)人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/ADM中ADM蓄積的影響方法：設(shè)陰性組、耐藥組、TMP組、VRP組。接種于培養(yǎng)瓶中，陰性對(duì)照組加入新鮮培養(yǎng)液，逆轉(zhuǎn)組加入川芎嗪至終濃度為600μmol/L，陽(yáng)性對(duì)
2、照組（VRP），加入VRP至終濃度為5μmol/L，繼續(xù)培養(yǎng)24h,加入ADM8000nmol/L，培養(yǎng)2h，以冰冷的PBS洗3次，胰酶消化為單個(gè)細(xì)胞懸液（不低于106個(gè)/mL）,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ADM平均熒光強(qiáng)度。激發(fā)光(λex)為480nm，發(fā)射光(λem)為575nm.結(jié)果：FCM檢測(cè)結(jié)果，Parental組，Resistance+TMP組和Resistance+VRP組平均熒光強(qiáng)度分別為耐藥細(xì)胞Resistance組的(121.83±23.2)%(P<0.01)、(163.78±39.
3、5)%(P<0.01)、(320.1±47.18)%(P<0.01)。表明TMP能使細(xì)胞內(nèi)的阿霉素蓄積增加，與VRP相似。四、HPLC法檢測(cè)TMP對(duì)細(xì)胞內(nèi)ADM濃度的影響方法：設(shè)親本組、耐藥組、TMP組、VRP組。將TMP組、VRP組分別在TMP（600μmol/L）或VRP（5μmol/L）中預(yù)培養(yǎng)3h，所有組再以8000nmol/LADM培養(yǎng)2h，以HPLC檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ADM濃度。以目標(biāo)藥與內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為橫坐標(biāo)，以藥物的濃度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，并考察重現(xiàn)性、精密度、加樣回收率、穩(wěn)定性等。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果以鹽酸阿霉素（分子量579.99）濃度單位折算為nmol/L。結(jié)果：HPLC結(jié)果顯示，ADM在0.1-40000ng/mL的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。檢測(cè)限(LOD)為0.05ng/mL，RSD為0.407。標(biāo)準(zhǔn)曲線為：C=47.73A+23.62(r=0.998)，其中C為阿霉素濃度，A為阿霉素與alprazolam的峰面積比值。實(shí)9華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，親本細(xì)胞攝入阿霉素的量為（2.45±0.52）μmol/L，耐藥細(xì)胞對(duì)阿霉素?cái)z入減少至（2.06±0.40）μmol/L
5、，TMP可逆轉(zhuǎn)耐藥情況而使阿霉素的蓄積量超過(guò)親本細(xì)胞的水平。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還表明，川芎嗪在使細(xì)胞內(nèi)阿霉素濃度蓄積增加的同時(shí)，川芎嗪本身在細(xì)胞內(nèi)的蓄積并未增加，說(shuō)明川芎嗪并非P-gp底物，它使細(xì)胞內(nèi)阿霉素濃度增加并非屬于與阿霉素競(jìng)爭(zhēng)受體結(jié)合位點(diǎn)所致。五、川芎嗪對(duì)人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL-7402/ADM中MDR1、MRP2、MRP3、MRP5mRNA表達(dá)的影響方法：設(shè)耐藥組、TMP組、VRP組。將TMP組、VRP組分別在TMP（600μmol/L）或VRP（5μmol/L）中預(yù)培養(yǎng)3h，所有組再以8000
6、nmol/LADM培養(yǎng)2h，采用PCR檢測(cè)MDR1,MRP2,MRP3和MRP5mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果以耐藥組（resistance）為100%，計(jì)算得各組值。結(jié)果顯示，TMP可使MDR1,MRP2,MRP3和MRP5mRNA表達(dá)分別達(dá)到耐藥組的（0.67±0.3）、（0.85±0.10）、（0.90±0.04）、（0.63±0.11），與耐藥組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，但VRP組除MDR1mRNA表達(dá)與陰性對(duì)照組有差異外，其余組無(wú)差異(P<0.05)。六、川芎嗪對(duì)人肝癌多藥耐
7、藥細(xì)胞BEL-7402/ADM中P-gp、MRP2、MRP3、MRP5蛋白表達(dá)的影響方法：細(xì)胞分設(shè)耐藥組、TMP組、VRP組。將TMP組、VRP組分別在TMP（600μmol/L）或VRP（5μmol/L）中預(yù)培養(yǎng)3h，所有組再以8000nmol/LADM培養(yǎng)2h，采用免疫印跡檢測(cè)P-gp、MRP2、MRP3、MRP5蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：結(jié)果表明TMP可使MDR1，MRP2，MRP3和MRP5蛋白表達(dá)
分別下調(diào)至陰性對(duì)照組(以1.0計(jì))的（0.49±0.04）、（0.61±0.13）、(0.38±
8、0.14）、
（0.68±0.07）(P<0.01)。P-gp、MRP2、MRP3及MRP5蛋白表達(dá)下降。(P<0.05)
但VRP組除P-gp表達(dá)下降（0.44±0.08）(P<0.01)外，其余蛋白表達(dá)無(wú)差異，與
mRNA結(jié)果一致。10華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)論1．川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP)自中藥川芎中分離，有研究表明
其對(duì)HCC的耐藥有作用，可能與逆轉(zhuǎn)P－gp有關(guān)，但仍然未見(jiàn)是否與逆轉(zhuǎn)其它
蛋白有關(guān)。本研究探討了TMP對(duì)人肝癌多藥耐藥細(xì)胞BEL
